第二阶段：确定是否使用了保护柱（预柱）。
一般在测定容易堵塞色谱柱的样品时，应该使用保护柱。如果使用了保护柱，那么压力的升高就有可能是保护柱的柱压升高导致的。
排查方法：取下色谱柱，仅以保护柱连接管路并正常输送流动相测试柱压，再反过来取下保护柱仅以色谱柱连接管路正常输送流动相测试柱压，如果仅当连接保护柱时柱压高的话，则为保护柱引起的柱压升高，请清洗、或更换保护柱。
第三阶段：如果不是上述第一、第二点原因造成压力升高，就可以确认是色谱柱的原
因了。
如果柱压是随着使用时间的延长，慢慢上升，这属于正常现象，是色谱柱达到使用寿命了，只能更换色谱柱了。
如果柱压是在实验开始时，实施中或经过一次、几次实验后，突然上升，则要结合实验情况考虑以下因素： 原因 柱长 色谱柱 柱内径 小柱长。 柱内径越小，柱压越高。可选择大内径色谱柱。 填料的形态也会对柱压有影响。硅胶基质的形态基质的形态 可以分为无定形和球形两种，现在一般装柱使用球形硅胶。 填料 颗粒大小 离效果的同时，可选择大粒径的填料。 填料合成条件不同厂家生产的色谱柱有的柱压可能相差4、5小粒径填料装填的色谱柱柱压较高，在不影响分解决方案 色谱柱越长，柱压越高。可根据实验情况适当减及装柱条件 个MPa，特别是低端和高端色谱柱之间，这一区别比较明显。例如：YMC公司生产的色谱柱，就属于高效高压型的。 流动相中存在的杂质也会堵塞色谱柱，引起柱压流动相的前处理 升高。因此，在实验前应进行必要的试剂前处理，包括滤膜过滤，用固相萃取方法去除容易吸附于色谱柱填料的强疏水性杂质。 不同流动相，因其理化性质差异，产生的柱压有所差异。例如：乙腈产生的压力低于甲醇，但两流动相的种类 者的分离效果相似。在某些情况下，可以通过替流动相 换流动相的种类减小柱压。 流动相成分间的比例，也可以引起柱压的差异。混合流动相的如：当甲醇/水=50/50时，柱压就较高。可以通比例 过调整流动相成分间的比例降低柱压。 温度的变化也会导致柱压的变化。最好使用柱温温度 箱控温，可根据实验情况，适当升高柱温以减小柱压。 含有不溶性成分 样品 盐分 过滤样品，充分离心，防止堵塞预柱及色谱柱，引起柱压升高。 样品或缓冲液中的盐分结晶于柱内，也可引起柱压升高。如：乙酸铵。根据实验情况，清洗色谱柱中的盐分，从而降低柱压。如：先用40～50 ℃的纯水，低速正向冲洗柱子，待柱压逐渐下降后，相应提高流速冲洗，柱压大幅度下降后, 用常温纯水冲洗，之后用纯甲醇冲洗柱子30 分钟。 被填料吸附沉积 样品污染沉积也会导致柱压升高。须根据实验情况和柱子类型进行清洗。（常规的清洗方法如下。） 常规的色谱柱清洗方法（正向冲洗）
使用比目前使用的流动相对样品溶解能力更强的试剂清洗色谱柱。如果您使用的流动相是乙腈：水（70:30），请使用更高浓度的乙腈水溶液进行清洗，比如乙腈：水（80:20）或乙腈：水（90:10）。但是，如果高浓度的乙腈水溶液导致样品溶解困难的话，请停止使用上述流动相，转而使用对样品易溶的流动相。
如果该方法仍不见效，请试用下述方法。 色谱柱清洗方法（反向冲洗）
将色谱柱反向连接（即与色谱柱上箭头标识相反的方向使流动相由出口处流入、入口处流出）输送流动相试试。此时，如果柱压太高会对色谱柱造成损坏，所以请将流速调至平时操作时的一半。但是，如果使用相同的流速，反洗比正向清洗柱压还低的话，可能会发生色谱柱入口处的填料在筛板处聚集，那么就使用原有流速进行反洗。反洗流动相的选择与上述正向冲洗相同，请选用比平时使用的流动相溶解性更强的、更易溶解样品的流动相。
注意，反洗时请断开检测器的管路连接，以避免污染检测器。 反洗色谱柱容易对色谱柱造成伤害，不到万不得已不要轻易使用。
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