GenScript(货号：L00350)内毒素检测试剂盒说明书

GenScript(货号：L00350)内毒素检测试剂盒说明书

（么么巫）

1：LAL粉末

底物添加1.7mL LAL试剂水，使其终浓度为2mM，震荡摇匀防产生气泡，分装，冻存与-80℃。

2：Chromogenic Substrate

底物加入1.7mL LAL试剂水，置于4℃保存，注意避光！ 3：Color-stabilizer #1

底物加入10mL buffer S ，保存于4℃。 4：Color-stabilizer #2和Color-stabilizer #3 分别底物中加入10mL LAL试剂水，保存于4℃ 5：内毒素标准溶液（瓶标20EU）

① 用2mL的LAL试剂水溶解内毒素粉末，涡旋15min，4℃保存1周； ② 举例怎样稀释成1EU/mL的内毒素

取5EU/mL的内毒素0.2mL，加入0.8mL LAL试剂水，即可得到1EU/mL的内毒素；

取10EU/mL的内毒素0.1mL，加入0.9mL LAL试剂水，即可得到1EU/mL的内毒素。

6：试验步骤

① 样品及标准样品各100uL，加入反应瓶中，涡旋30s，一个空白，一组标准品（4个）；

② 每个瓶中加入100uL LAL重组溶液，轻悬

③ 预计检测样本内毒素浓度（牛血清内毒素浓度应低于0.02EU/mL），进行标准品稀释。

预计检测样本的内毒素浓度在0.01~0.1EU/mL，可稀释成0.1 、0.05、0.025、0.01EU/mL，那么试验中孵化架子上所有样品在37℃水浴或加热块中作用45min；

预计检测样本的内毒素浓度在0.1~1EU/mL，可稀释成1 、0.5、0.25、0.1EU/mL，

那么试验中孵化架子上所有样品在37℃水浴或加热块中作用10

④ 每瓶加入100uL 重组Chromogenic Substrate溶液，轻摇，37℃孵育6min； ⑤ 每瓶添加重组Color-stabilizer #1溶液 500 uL，涡旋混匀；每瓶添加重组Color-stabilizer #2溶液 500 uL，涡旋混匀；每瓶添加重组Color-stabilizer #3溶液 500 uL，涡旋混匀；

⑥ 分光光度计读数：545nm

⑦ 计算：如果一个样本的平均吸光度是x,内毒素浓度的样品将(0.2618 x - 0.0012)欧盟/毫升。