实验一：使用高倍显微镜观察几种细胞
一、实验目的：
1、学会如何使用显微镜观察细胞； 2、了解细胞的结构； 3、学会制作临时装片。
二、实验材料：（实验材料可换）松针、动物血液、动物神经细胞永久装片 三、实验用具： 载玻片、盖玻片、蒸馏水、滴管、镊子、土豆、刀片、显微镜（物镜5X、10X、40X） 四、方法步骤：
1、制作松针的临时切片： （1）取干净的载玻片一个平置于试验台上，用滴管在载玻片中央滴一滴蒸馏水。 （2）将土豆切成条状（截面约：0.5X0.5cm)取两条，将一根松针夹在两个土豆条之间，用刀片削成尽量薄的薄片，削时，手腕不动，靠大臂带动小臂移动刀片。切片数次。从中选取较薄的切片，置于载玻片的水滴上。
（3）从一侧轻轻盖上盖玻片，不要产生气泡。用吸水纸轻轻吸去盖玻片周围的水滴，即完成临时切片的制作。 2、观察切片：
（1）取出显微镜，置于试验台上靠左的位置，打开光源。
（2) 将上步制作好的切片置于显微镜的载物台上，调整载物台位置，使盖玻片对准光源。
（3）使用5X物镜观察切片，使松针切片在视野中心，换成10X物镜，观察松针叶面横切结构。
（4）换成40X物镜观察，注意细胞及细胞内物质结构，画图。 3、 动物血液临时装片的制作及观察（除了不用切片，其他类似） 4、 动物神经细胞永久装片的观察。 五、考点提示：
1、松针的叶面结构是什么样的？
2、动物细胞的结构是什么样的？与植物细胞又什么不同？
3、显微镜的物镜倍数愈大，视野的亮度如何？物体的大小如何？ 4、如何调节焦距？
5、如何才能使切片尽量的薄？切片的厚薄对显微镜下观察的效果有什么影响。
实验二：检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质
一、实验目的：
尝试用化学试剂检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质，阐明实验原理—颜色反应，识记和区分用于可溶性还原糖、脂肪、蛋白质鉴定的试剂及产生的特定颜色，初步掌握鉴定上述化合物的基本方法，学会描述实验现象，掌握NaOH溶液和CuSO4溶液的使用方法。 二、实验原理：
某些化学试剂能使生物组织中的有关有机化合物，产生特定的颜色反应。 1、生物组织中普遍存在的可溶性糖类较多，有葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖。前三种糖的分子内都含有游离的具还原性的半缩醛羟基，因此叫做还原糖；蔗糖分子内没有，为非还原糖。实验中所用的斐林试剂，只能鉴定生物组织中可溶性还原糖，而不能鉴定可溶性非还原糖。
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可溶性还原糖（如葡萄糖、果糖、麦芽糖）与斐林试剂发生作用，可生成砖红色的Cu 2O沉淀。如：
葡萄糖 + 2Cu2+ + 4OH— 加热 葡萄糖酸 + Cu 2O↓（砖红色）+ H 2O 即Cu 2+被还原成Cu 2O，葡萄糖被氧化成葡萄糖酸。
用斐林试剂鉴定还原糖时，溶液变化过程为：浅蓝色→棕色→砖红色沉淀 淀粉遇碘变蓝色（直链）或紫（红）色（支链）。
2、脂肪和类脂（磷脂、糖脂、固醇脂等）统称为脂类。它是构成人体组织的正常成分，不溶于水而易溶于酒精、乙醚、氯仿等脂溶剂中。在化学组成上，脂类属于脂肪酸的酯或与这些酯有关的物质。脂类的主要功能是氧化供能。 脂肪主要存积于脂肪组织中，并以油滴状的微粒存在脂肪细胞浆内。 在病理检验中，脂类染色法最常用以证明脂肪变性，脂肪栓子以及肿瘤的鉴别。脂类染色使用最广泛的染料是苏丹染料，最常用的有苏丹Ⅲ，苏丹Ⅳ，苏丹黑及油红O等。脂肪被染色，实际上是苏丹染料被脂肪溶解吸附而呈现染料的颜色。经研究认为组织中脂质在液态或半液态时，对苏丹染料着色效果最好。根据这一原理，适当提高温度（37℃-60℃）对组织切片染色效果是有好处的。
脂类染色，用冰冻或石蜡切片，以水溶性封固剂封固，如甘油、明胶和阿拉伯糖胶等。
脂肪可以被苏丹Ⅲ染液染成橘黄色或橙红色（或被苏丹Ⅳ染液染成红色），胆脂素呈淡红色，脂肪酸不着色，细胞核呈蓝色。
3、蛋白质与双缩脲试剂发生作用，产生紫色反应。（蛋白质分子中含有很多肽键，在碱性NaOH溶液中能与双缩脲试剂中的Cu2+作用，产生紫色反应。）
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三、实验材料：
1、做可溶性还原性糖鉴定实验，应选含糖高，颜色为白色的植物组织，如苹果、梨。（因为组织的颜色较浅，易于观察。）经试验比较，颜色反应的明显程度依次为苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜。 2、做脂肪的鉴定实验。应选富含脂肪的种子，以花生种子为最好，实验前一般要浸泡3~4小时（也可用蓖麻种子）。 3、做蛋白质的鉴定实验，可用富含蛋白质的黄豆或鸡蛋清。
4、淀粉的鉴定：马铃薯匀浆。
四、实验用具：双面刀片、试管（最好用刻度试管）、试管夹、试管架、大小烧杯、小量筒、滴管、酒精灯、三脚架、石棉网、火柴、载玻片、盖玻片、毛笔、吸水纸、显微镜 五、实验试剂： 1．斐林试剂（包括甲液：质量浓度为0.1g/ mL NaOH溶液和乙液：质量浓度为0.05g/ mL CuSO4溶液） 2．苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液 3．双缩脲试剂（包括A液：质量浓度为0.1g/ mL NaOH溶液和B液：质量浓度为0.01g/ mL CuSO4溶液） 4．体积分数为50%的酒精溶液 5．碘液 6．蒸馏水 六、方法步骤： 一、可溶性糖的鉴定 操 作 方 法 注 意 问 题 解 释 1. 制备组织样液。 苹果或梨组织液必须临时因苹果多酚氧化酶含量（去皮、切块、研磨、过制备。 高，组织液很易被氧化滤） 成褐色，将产生的颜色掩盖。 2. 取1支试管，向试管 内注入2mL组织样液。 - 3 -
3. 向试管内注入1mL新制的斐林试剂，振荡。 斐林试剂很不稳定，甲、乙液混合保存时，生成的Cu ( OH ) 2在70~ 900C下分解成黑色CuO和水； 甲、乙液分别加入时可能会与组织样液发生反应，无Cu OH生成。 4. 试管放在盛有最好用试管夹夹住试管上防止试管内的溶液冲出50-650C温水的大烧杯部，使试管底部不触及烧杯试管，造成烫伤； 中，加热约2分钟，观察底部，试管口不朝向实验 到溶液颜色：浅蓝色 → 者。 棕色 → 砖红色（沉淀） 也可用酒精灯对试管直接缩短实验时间。 加热。 二、脂肪的鉴定 操 作 方 法 注 意 问 题 解 释 花生种子浸泡、去皮、切下一干种子要浸泡3~4因为浸泡时间短，不易切些子叶薄片，将薄片放在载玻小时，新花生的浸片；浸泡时间过长，组织较片的水滴中，用吸水纸吸去装泡时间可缩短。 软，切片不易成形。切片要片中的水。 尽可能薄些，便于观察。 在子叶薄片上滴2~3滴苏丹Ⅲ染色时间不宜过 或苏丹Ⅳ染液，染色1分钟。 长。 用吸水纸吸去薄片周围染液， 酒精用于洗去浮色，不洗去用50%酒精洗去浮色，吸去酒浮色，会影响对橘黄色脂肪精。 滴的观察。同时，酒精是脂溶性溶剂，可将花生细胞中的脂肪颗粒溶解成油滴。 用吸水纸吸去薄片周围酒精， 滴上清水可防止盖盖玻片滴上1~2滴蒸馏水，盖上盖玻时产生气泡。 片。 低倍镜下找到花生子叶薄片的装片不宜久放。 时间一长，油滴会溶解在乙最薄处，可看到细胞中有染成醇中。 橘黄色或红色圆形小颗粒。 三、蛋白质的鉴定 操 作 方 法 注 意 问 题 解 释 制备组织样液。 黄豆浸泡1至2天，容易（浸泡、去皮研磨、过研磨成浆，也可购新鲜豆滤。） 浆以节约实验时间。 鉴定。加样液约2ml于试A液和B液也要分开配制，先加NaOH溶液，为Cu2+管中，加入双缩脲试剂A，储存。鉴定时先加A液后与蛋白质反应提供一个摇匀；再加入双缩脲试剂加B液。 碱性的环境。A、B液混装B液3~4滴，摇匀，溶液 或同时加入，会导致Cu2+变紫色。 CuSO4溶液不能多加。 变成Cu ( OH ) 2沉淀，- 4 -
应将组成斐林试剂的甲液、乙液分别配制、储存，使用前才将甲、乙液等量混匀成斐林试剂； 切勿将甲液、乙液分别加入苹果组织样液中进行检测。
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