2、记录个人活菌测定中各平行数据，计算最终平均值。答：平行试验中，其他几个由于菌落连成一片，无法计数。只有如图一个平板中大约有120个透明圈，因为是稀释了5亿倍，所以600亿\\克。 思考题：
在枯草芽孢杆菌固态培养过程中，为了防止霉菌与酵母的污染，可采用什么方法？ 答：可以加入抗真菌制剂。
实验三、 淀粉糖化与酒精发酵（5学时）
实验类型：综合性 实验目的：
1．了解酒精发酵的主要类型、工艺原理及其控制条件 2．熟悉酒精生产的工艺流程、掌握酒精发酵的操作方法 3. 掌握用酶法从淀粉原料到水解糖的制备原理及方法 4. 掌握在实验室中模拟酒精发酵的工艺流程
实验原理
玉米粉、大米粉中可供发酵的物质主要是淀粉，而酿酒酵母由于缺乏相应的酶，所以不能直接利用淀粉进行酒精发酵，因此必须对原料进行预处理，包括蒸煮（液化）、糖化等，蒸煮可使淀粉糊化，并破坏细胞，形成均一的醪液，能更好的接受糖化酶的作用，并转化为可发酵性糖，以便酵母进行酒精发酵。
在无氧条件下酵母菌利用可发酵性糖转化为酒精和二氧化碳的作用，称为酒精发酵，是生产酒精及各种酒类的基础，可通过测定发酵过程中产生CO2的量和最终产物酒精的量得知酵母的发酵能力。
实验内容 1、原料的粉碎
将玉米、大米用粉碎机粉碎到一定程度，玉米淀粉含量为70%，大米淀粉含量为75%。 2、蒸煮糊化
称取一定量的粉碎后淀粉质原料，按照一定的料水比（100g：200ml），调制淀粉乳，90-100℃条件下恒温水浴加热，淀粉乳受热后，在一定温度范围内，淀粉粒开始破坏，晶体结构消失，体积膨大，粘度急剧上升，呈粘稠的糊状，即成为非结晶性的淀粉。 3、糖化
经蒸煮糊化后的醪液，经过淀粉酶的糖化作用，将原料中的淀粉转化为可发酵性糖，供酵母利用。
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为加快糖化速度，可以提高酶用量，缩短糖化时间，但酶用量太高，反而使复合反应严重，最终导致葡萄糖值降低，在实际生产中，应充分利用糖化罐的容量，尽量延长糖化时间，减少糖化酶用量。
酶参考用量：淀粉乳33%，60℃，ph4.5，酶240U/g绝干淀粉，糖化时间16h。
糊化醪液调整pH4.5，往其中加入一定量的淀粉酶（120U/g）、糖化酶（120U/g），60℃恒温下不断搅拌，直至粘度下降到一定程度，淀粉完全糖化 4、发酵
（1）干酵母活化
将干酵母按1:20的比例投放于37℃的温水中复水20min。目的：恢复酵母细胞的正常功能。 （2）淀粉醪液糖化后，取400ml上清液于洁净的大可乐瓶中，加相同体积的水稀释，加入活化好的酵母种液5ml，混匀，28度培养箱中静止培养36h左右。 5、二氧化碳生成的检验
（1）观察三角瓶中的发酵液有无气泡溢出；
（2）滴入10%氢氧化钠1ml于发酵液试管中，观察，如气体逐渐消失，则说明有二氧化碳的存在； 6、二氧化碳生产量的测定
（1）接种完，擦干瓶外壁，于天平上称量，记为W1;
（2）实验结束，取出瓶轻轻摇动，使二氧化碳尽量溢出，在同一天平上称量，记为W2； （3）二氧化碳生成量= W1-W2 7、酒精生成的检验
（1）打开瓶塞，嗅闻有无酒精气味； （2）取发酵液5ml，加10%硫酸2ml；
（3）再加入1% K2Cr2O7溶液10-20滴，如颜色由黄色变为黄绿色，则说明有酒精产生。 K2Cr2O7+H2SO4+CH3CH2OH——CH3COOH+K2SO4+Cr2（SO4）3 实验器材及试剂：
菌种：活性干酵母
试剂：培养基各成分、大米粉、活性干酵母、淀粉酶、糖化酶、大可乐瓶（学生自备） 溶液：10% H2SO4、1%K2Cr2O7、10%NaOH
器材：试管、培养箱、灭菌锅、三角瓶、水浴锅、粉碎机、离心机
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1、 详细记录实验过程中各参数及数据。
结果记录如表： 淀粉 100g 淀粉酶 10.522g CaCl2 0.17g 糖化酶 1.17g 糖化后，加入可乐瓶中的上清：400ml, 活化的酵母种液：10ml ，置于28℃的培养箱中静置培养36h左右。
2、 对实验结果的判断与分析。
实验结果检验：○1二氧化碳生成的检验 培养约48h后，观察瓶中混合液，淀粉大部分沉降在瓶底，上清浓度较稀，靠瓶壁边缘有一连串微小气泡
○2酒精生成的检验 打开瓶塞，闻到有浓重酒精气味。取发酵液5ml, 加10%硫酸2ml,加1%K2Cr2O7
溶液10-20滴，颜色由黄色变为黄绿色，稍加热后现象产生更快，更明显。
图示：酒精生成的检验结果 左侧：蒸馏水5ml,颜色偏黄，透明度高 右侧：发酵液5ml,黄绿色，与对
照管有明显差异
1、思考题：现有3株不同来源的酒精酵母，请设计实验判断哪株酵母发酵酒精能力最强？
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实验四 米曲霉固体发酵生产纤维素酶及酶解底物反应（5实验类型：综合性 实验目的：
1、了解米曲霉固体发酵产酶情况 2、掌握微生物固体发酵操作技术
3、了解纤维素酶提取方法及酶活性定性测定方法 实验原理
学时）
纤维素酶是降解纤维素的一组酶的总称，是起协同作用的多组分酶系，属于诱导酶，其产生需要纤维素类物质的诱导。实验中以米曲霉为发酵菌株，稻草作为产酶诱导物。 实验内容
1、米曲霉菌种活化
（1）配制PDA培养基：称取200g马铃薯，洗净去皮切碎，加水1000ml煮沸半个小时，纱布过滤，再加20g葡萄糖和20g琼脂，充分溶解后趁热纱布过滤，分装试管，每试管约5-10ml（视试管大小而定），15磅蒸气（121℃）灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面，冷却后贮存备用。
（2）在无菌超净台上接种保藏的米曲霉于PDA斜面，28℃培养5-7天，斜面上长满孢子。
2、配制发酵培养基：15g麸皮+10g稻草粉，0.5%KH2PO4，0.5% (NH4)2SO4，加15ml水（加水量40%～60%），拌匀，装瓶；
3、灭菌：121℃ 灭菌30min，冷却至室温。 4、米曲霉孢子悬浮液制备
已培养好的米曲霉孢子斜面一支，加入约10ml无菌水，洗下孢子，制成孢子悬液。 5、接种：
用移液管在无菌条件下吸取一定量的悬液，移入灭菌好的固体培养基中，于30度条件下培养96h，期间每隔12h摇动三角瓶一次。
6、提取粗酶液：向瓶中加入无菌水约50ml，浸泡固体曲30min-1h；过滤得粗酶液。 7、酶活性测定
（1）配制1%CMC底物平板：
配方：1g羧甲基纤维素钠，1.8g琼脂， 100ml，琼脂完全溶解后，加入0.03g曲利本蓝，倒平板，每皿约15ml。
（2）打孔：
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