HPLC 法测定红参浸膏中人参皂苷Rg1、Re、Rb1 和Rg3 的含量

HPLC 法测定红参浸膏中人参皂苷Rg1、Re、Rb1 和Rg3 的含量

作者：于善娟

来源：《现代食品》 2019年第10期

◎ 于善娟

(延边可喜安生物科技有限公司,吉林?延吉?133000)

Yu Shanjuan

(Yanbian Kexi’an Bio-technology Co., Ltd., Yanji?133000, China)

摘?要:目的:建立可同时测定红参浸膏中人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rg3含量的高效液相色谱方法。方法:采用HPLC方法,色谱柱是Agilent Zorbax SB-C18柱(4.6 mm×150 mm,4 μm),以乙腈-水为流动相进行梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,柱温30 ℃,检测波长203 nm。结果:红参浸膏中人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rg3的含量分别为0.22%,0.24%,0.67%,0.48%)。该方法精密度高,人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rg3的分离度好,相关系数分别是0.999 6、0.999 0、0.999 5及0.999 6);变异系数CV分别为0.7%、0.7%、0.6%及0.6%;加标回收率分别达102%、105%、101%及102%。结论:建立的HPLC分析检测方法可以用作红参浸膏实际生产时的质量监控。

关键词:人参皂苷Rg1;人参皂苷Re;人参皂苷Rb1;人参皂苷Rg3;HPLC

Abstract:Objective: To establish a HPLC method for simultaneous determination of Ginsenoside Rg1, Ginsenoside Re, Ginsenoside Rb1 and Ginsenoside Rg3 in Red ginseng extract. Methods: This paper applied HPLC—VWD detector,the column is Agilent Zorbax SB-C18 (4.6 mm×150 mm, 4 μm),gradient elution is carry out by taking acetonitrile-water as a mobile phase,flow rate 1.0 mL·min-1, column

temperature 30 ℃,detection wavelength 203 nm. Results: it was found the content of Ginsenoside Rg1, Re, Rb1 and Rg3 in Red ginseng extract are 0.22%, 0.24%, 0.67% and 0.48% respectively. It was found the method has high precision, and Ginsenoside Rg1, Re, Rb1 and Rg3 have good separation degree. Correlation coefficients were

respectively 0.999 6, 0.999 0, 0.999 5, 0.999 6). Coefficient of variation were

0.7%, 0.7%, 0.6%, 0.6% respectively. Recovery percents were respectively up to 102%, 105%, 101%, 102%. Conclusion: The established HPLC analysis and detection method

can be used for the quality control of the actual production of Red ginseng extract.

Key words: Ginsenoside Rg1; Ginsenoside Re; Ginsenoside Rb1; Ginsenoside Rg3; HPLC

中图分类号:R286

人参是我国传统的名贵药食同源药(食)材,已有4 000多年的应用历史。国内外专家普遍认为,红参是充分发挥人参药(食)用价值的主要炮制品,以红参为原料的深加工产品应运而生。

红参浸膏(长森源)是精选长白山脉优质鲜人参(人工种植/五年生),采用现代新技术、新工艺加工而成的,通过低温提取浓缩红参中的有效成分,完整保留了红参的特有成分和固有的特异芳香。

众所周知,目前大多数企业都是选择用高效液相色谱法来分析检测人参及人参加工产品中人参皂苷含量的,中华人民共和国药典2015版中规定了人参中人参皂苷Rg1、人参皂苷Re和人参皂苷Rb1含量的检测方法,但并无出处可查到在同一条件下同时对人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1和人参皂苷Rg3含量的检测方法。

针对不同的人参加工产品,企业都会根据高效液相色谱仪、分析色谱柱、企业标准等变量摸索出一套适合的分析方法,为了探索延边可喜安生物科技有限公司生产的红参浸膏中人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rg3的含量,经过多次反复试验,得出本文内容。

可应用于红参浸膏中人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rg3的含量检测,方便、实用、准确。

1?实验部分

1.1?仪器和装置

1260 Infinity Ⅱ高效液相色谱仪(美国Agilent Technologies公司);SQP型电子天平(塞多利斯科学仪器(北京)有限公司);TD5台式低速离心机(长沙英泰仪器有限公司);KQ-300VDE型三频数控超声波清洗仪(昆明市超声仪器有限公司);0.45 μm过滤器(天津市科亿隆实验设备有限公司);无菌注射器若干;容量瓶若干;离心管若干。

1.2?材料与试剂

红参浸膏(长森源);甲醇(分析纯);甲醇(色谱纯);乙腈(色谱纯);纯化水。

1.3?分析条件

高效液相色谱分析条件:紫外检测品(VWD),Poroshell 120EC-C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,4 μm);

检测波长为203 nm;以乙腈为流动相A,以水为流动相B,按表1进行梯度洗脱;柱温30 ℃;流速1.0 mL·min-1。理论板数按人参皂苷Rg1峰计算均不低于6 000[1]。

1.4?实际样品

精确称取红参浸膏1 g(精确到0.000 1 g),至

50 mL容量瓶中,加入15 mL水,使其完全溶解后加入

35 mL甲醇(分析纯),超声处理30 min,取出,放置至室温,加70%甲醇定容至50 mL[2]。离心10 min,取上清液,用0.45 μm微孔滤膜过滤,做为供试品溶液,进行色谱分析。

2?结果与讨论

2.1?分离度

中华人民共和国药典(除另有规定外)规定,待测组分与相邻共存物之间的分离度应大于1.5[1]。本文实验中得出的色谱峰间分离度均大于2.5。

2.2?实际样品分析

2.2.1?定性分析

任选一浓度的人参皂苷Rg1、Re、Rb1和Rg3混合标样,以及红参浸膏样品,在相同的色谱条件下,对两者进行液相分析,得出下面两组色谱图(见图1与图2)。根据人参皂苷Rg1标样色谱峰的保留时间与红参浸膏色谱图中的保留时间相对应的峰,可以判定此峰即为红参浸膏中人参皂苷Rg1对应的响应值。同理可以判定红参浸膏中含有人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg3对应的响应值。

2.2.2?定量分析

实验中选取外标法对红参浸膏中的人参皂苷Rg1、Re、Rb1及Rg3的含量进行定量分析。配制0.2 mg·mL-1

的混合标样,再用甲醇稀释成不同浓度的标样,吸取10 μL进行色谱分析,测得相应的响应值(见表2~5),并绘制标准工作曲线(图3~6),得出对应的工作曲线方程和相关系数的平方值。

吸取10 μL红参浸膏样品溶液进行色谱分析,测得相应的响应值。为了保证实验的准确度,对供试品样品重复试验3次,计算出平均值。数据结果见表6。