检验微生物期末考查
【要求】
在规定时间内独立完成其细菌学检验并写出实验报告上交 【实验设计】 一、主要材料与试剂
试 剂：氧化酶，3%H2O2，兔血浆，胆盐溶液，Optochin药片，革兰染色液配套试剂，
吲哚试剂，沙门、志贺菌诊断血清
培养基：血平板，SS平板，KIA斜面培养基，MIU培养基， 二、检验程序设计与原理（结合自己的检验标本来写，包括实验条件）
脓汁标本
直接涂片染色镜检
观察脓汁性状(颜色、气味等) 分离培养（血平板）35℃,pH7.4~7.6 18~24h,有氧
观察菌落形态
涂片染色镜检
G+ G－
触酶试验
+ － 葡萄球菌 链球菌 血浆凝固酶试验
+ －
金黄色葡萄球菌 其他葡萄球菌
氧化酶试验
+ －
绿脓杆菌 肠道杆菌
Optochin药敏试验/胆汁溶菌酶试验
KIA/MIU 初诊
+ － 肺链 其他链球菌
粪便标本 观察粪便性状(颜色、气味等)
分离培养（SS平板）挑取无色菌落 35℃,pH7.4~7.6 18~24h,有氧
观察菌落形态
涂片染色镜检
G－
氧化酶试验
－ +
肠道杆菌 绿脓杆菌
确诊 血清学鉴定 KIA/MIU
【微生物学诊断】
脓汁标本P30：乙型溶血性链球菌 粪便标本S28：福氏志贺菌 【实验讨论】
1． 脓汁标本P30检验时，血平板培养24h后，可见溶血环，不是草绿色溶血环，排除甲
链、肺链，也不像完全溶血，不能确定是乙链，做optochin试验和胆汁溶菌酶试验均为阴性，确定不是肺链，测量血琼脂平板厚达6mm,可知是因为血平板太厚，导致β溶血没有溶透平板。故根据菌落形态结合革兰染色特点（G+链球菌）可知该标本致病菌为：乙型溶血性链球菌
2． 粪便标本S28检验时，由于肠道正常菌群存在，故直接革兰染色镜检无意义，SS强选
择平板培养24h后，平板可见红色菌落和无色半透明菌落两种，红色为埃希菌属，无色为可疑致病菌，故应挑取无色菌落进行随后的各种检验。
3． 临床上检出致病菌后，还应做药敏实验来指导临床医生用药，以减少细菌耐药，同时
达到有效抑菌或杀菌的效果。常用k-b纸片扩散法或肉汤稀释法来做。有条件可做联合药敏试验，根据实验结果，临床医生可联合多种抗生素协同抑菌或杀菌
【附：实验原始记录】
2012/11/12 周一 室温：17℃ 阴 讨论实验方案 脓汁：
1． 革兰染色镜检，血平板培养
2． 若G+，则为葡萄球菌或链球菌，用触媒实验来区别，葡萄球菌（触酶+），链球菌（触
酶—）
若G—，则为肠道杆菌或假单胞菌，用氧化酶试验鉴别，肠道杆菌（氧化酶—），假单胞菌（氧化酶+）
3． 葡萄球菌血平板培养可见，金葡为黄色菌落，因其分泌脂溶性黄色色素，其他葡萄球
菌为白色或无色菌落，用血浆凝固酶鉴别，金葡（血浆凝固酶+），其他葡萄球菌（血浆凝固酶—）。
4． 链球菌用菌落形态结合生化实验鉴别，乙链（β溶血），甲链和肺链（α溶血），在用
optochin试验和胆汁溶菌酶试验鉴别，肺链+，甲链— 粪便
1． 革兰染色镜检，SS平板培养
2． G—，则为肠道杆菌或假单胞菌，用氧化酶试验鉴别，肠道杆菌（氧化酶—），假单胞菌
（氧化酶+）
3． 假单胞菌最常见为绿脓杆菌，可用O/F试验及草绿色水溶性色素，菌落生姜味来确定 4． 肠道杆菌用生化试验KIA/MIU鉴别到属，在用血清学实验鉴定到种（多价→单价）
2012/11/13 周二 室温：20℃ 晴 脓汁P30
物理性状：西瓜红色脓汁，无特殊气味
直接革兰染色镜检：100×10油镜下可见：G+短链状排列球菌 分区划线接种血琼脂平板，放optochin纸片，35℃温箱有氧孵育 粪便S28
物理性状：棕褐色，无特殊气味
分区划线接种SS平板，35℃温箱有氧孵育
2012/11/14 周三 室温：18℃ 阴 脓汁P30
血平板上长出半透明细小菌落，直径0.5mm~0.75mm，光滑湿润圆形，β溶血环 Optochin药敏实验（—）
因平板太厚，血未溶透，β溶血环不太典型，做胆汁溶菌酶补充鉴定，结果（—） 确定该菌为：乙型溶血性链球菌 粪便S28
SS平板上长出两种菌落，一种为红色菌落，较大，光滑湿润圆形，根据菌落形态可知为埃希菌属，属正常菌群，无诊断价值；另一种为无色半透明菌落，中等大小，光滑湿润圆形，挑取该可疑菌落，革兰染色，结果为G-短杆菌，再进行氧化酶实验，结果（－），证明为肠道杆菌，不是假单胞菌，继续接种KIA、MIU鉴定培养基，置于35℃保温箱，有氧孵育，两天后看结果
2012/11/16 周五 室温：16℃ 小雨 粪便S28
KIA（KA--），MIU（---）
血清学，志贺多价+ 福氏多价+
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