此本实验的自变量是供试菌种和温度。②由试题分析可知，山鸡椒油对真菌的抑制作用强于对细菌，热处理对山鸡椒油的作用无影响。
（4）由题意知1mL水样中的菌落数是（32+34+36）÷3÷0.1×100=3.4×104个，每升水样中的活菌数为3.4×10×10=3.4×10。常用的微生物接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法，其中稀释涂布平板法可以用计数。
12. 编码蛋白甲的DNA序列（序列甲）由A、B、C、D、E五个片段组成，编码蛋白乙和丙的序列由序列甲的部分片段组成，如图1所示。回答下列问题：
4
3
7
（1）现要通过基因工程的方法获得蛋白乙，若在启动子的下游直接接上编码蛋白乙的DNA序列（TTCGCTTCTCAGGAAGGA），则所构建的表达载体转入宿主细胞后不能翻译出蛋白乙，原因是___________。
（2）某同学在用PCR技术获取DNA片段B或D的过程中，在PCR反应体系中加入了DNA聚合酶、引物等，还加入了序列甲作为___________，加入了___________作为合成DNA的原料。 （3）现通过基因工程方法获得了甲、乙、丙三种蛋白，要鉴定这三种蛋白是否具有刺激T淋巴细胞增殖的作用，某同学做了如下实验：将一定量的含T淋巴细胞的培养液平均分成四组，其中三组分别加入等量的蛋白甲、乙、丙，另一组作为对照，培养并定期检测T淋巴细胞浓度，结果如图2。
①由图2可知，当细胞浓度达到a时，添加蛋白乙的培养液中T淋巴细胞浓度不再增加，此时若要使T淋巴细胞继续增殖，可采用的方法是___________。细胞培养过程中，培养箱中通常要维持一定的C20浓度，C20的作用是_____________________。
②仅根据图、图2可知，上述甲、乙、丙三种蛋白中，若缺少___________（填“A”、“B”、“C”、“D”或“E”）片段所编码的肽段，则会降低其刺激T淋巴细胞增殖的效果。 【答案】 (1). 编码乙的DNA序列起始端无ATG，转录出的mRNA无起始密码子 (2). 模
板 (3). dNTP (4). 进行细胞传代培养 (5). 维持培养液是的pH (6). C 【解析】
（1）题干信息基因序列（TTCG……)，结合转录过程中的碱基配对原则，可知其转录出的mRNA上没有起始密码子AUG。（2）PCR需要的条件包括引物、耐高温的DNA聚合酶、模板、四种脱氧核糖核苷酸。（3）①动物细胞培养中，细胞具有贴壁生长以及接触抑制的特点，因此若要使T淋巴细胞继续增殖，在培养中需要用胰蛋白酶处理贴壁的细胞并进行分瓶培养，分瓶后的培养称为传代培养；动物细胞培养过程中加入CO2，作用是维持培养液的pH。②据图分析，丙与对照接近，甲和乙都有较大影响，在甲、乙中存在但在丙中不存在的片段是C，所以缺少C片段会降低效果。
【考点定位】基因工程、细胞工程
【名师点睛】解题过程中，没有联想到“动物细胞具有贴壁生长以及接触抑制的特点”而误认为（3）①小题中细胞不能继续增殖的原因是缺乏营养。
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