Survivin-Fk质粒的构建及诱导树突状细胞疫苗抗胃癌研究

Survivin-Fk质粒的构建及诱导树突状细胞疫苗抗胃癌研究

王秋爽;崔忠惠;孙华文;谭海燕;童仕伦

【期刊名称】《中华实验外科杂志》 【年(卷),期】2011(028)003

【摘要】目的 观察Survivin-FK(Sur-Fk)基因治疗小鼠胃癌的效果.方法 将FK-cDNA插入pcDNA3.1质粒的多克隆位点,用Survivin基因启动子替代pcDNA3.1质粒的巨细胞病毒(CMV)启动子,构建成Survivin-Fk重组质粒.用脂质体法将Sur-Fk基因转染到胃癌细胞SGC-7901;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Westem blot检测转染的效果,并进行转基因瘤细胞的成瘤性实验,实验分4组,每组20只小鼠,小鼠生存时间分为小于40、70、100 d 3个阶段,观察肿瘤的生长情况及小鼠的生存时间并测量肿瘤大小;并且切取肿瘤组织,经过处理后,用流式细胞仪分析肿瘤中树突状细胞(DC)细胞表面MHC-Ⅰ/Ⅱ表达.结果 构建得到的重组质粒Sur-Fk质粒,用ApaI和EcoRI酶切鉴定,琼脂糖电泳鉴定,得到相应的特异片段,提示Sur-Fk质粒重组质粒构建成功;转基因瘤细胞的成瘤实验中,SGC-7901-SUR-FK组的肿瘤大小为(0.30±0.13)cm3,小鼠的生存时间40、70、100 d的分别存活2、3、15只小鼠,在肿瘤大小和小鼠的生存时间方面,SGC-7901-SUR-FK组与SGC-7901组和SGC-7901-FK组之间差异有统计学意义;SGC-7901-SUR-FK组肿瘤周围DC上MHC-Ⅰ/Ⅱ类分子的平均表达率分别上调93.6%和91.4%,与SGC-7901组和SGC-7901-FK组及空白组表达率比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 Survivin启动子可启动下游FK基因特异性表达于SGC-7901肿瘤细胞,从而对DC有强烈的趋化作用,引起肿瘤周围DC的MHC-Ⅰ/Ⅱ类分子的表达上调,显著提高基因治疗胃癌效