MTT细胞增殖及细胞毒性

南京恩晶生物MTT细胞增殖及细胞毒性检测方法 一、产品简介 EnoGene? MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)用于细胞增殖和细胞毒性的检测。MTT是噻唑蓝（3-(4,5- dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide），可以被活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶还原生成结晶状的深紫色产物甲臜（formazan）。formazan可以被DMSO完全溶解，然后通过酶标仪测定490nm波长附近的吸光度。细胞增殖速度越快，则吸光度越高；细胞毒性越大，则细胞增殖减慢从而导致吸光度降低。 二、操作步骤

1. 细胞消化、计数、制成浓度为2～10×104个/ml的细胞悬液,96孔板中每孔加入100ul细胞悬液（每孔0.2～1X104个细胞）；

2. 96孔板置于37℃，5% CO2培养箱中培养24小时； 3. 用完全培养基稀释药物至所需浓度，每孔加入100μL相应的含药培养基，同时设立阴性对照组，溶媒对照组，阳性对照组，每组五个复孔；

4. 96孔板置于37℃，5% CO2培养箱中培养72小时； 5. 将96孔板进行MTT染色，λ=490nm，测定OD值。 1) 每孔加入20μL MTT，在培养箱继续培养4小时；

2) 弃去培养基(贴壁细胞可直接弃培养基，悬浮细胞需1000R，离心10min再弃培养基)，每孔加入150μL DMSO溶解，摇床10分钟轻轻混匀；

3) λ=490nm，酶标仪读出每孔的OD值，计算抑制率，及IC50值。

三、注意事项

1.悬浮细胞用此法时必须经离心后才能吸出上清再加DMSO。

2. Formazan的生成不仅与活细胞数成比例，也受作用时间的影响，因此当样品较多时测定的OD值可能随时间而变。 3. MTT溶液为黄色，需避光保存，长时间光照会导致失效。当颜色变为灰绿色时，请勿使用。MTT溶液在4℃或较低温度情况下会凝固，可以20-25℃水浴温育片刻至全部融解后使用。 4.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 5. 请穿实验服并戴一次性手套操作。