乙肝两对半标准操作规程POS

乙肝五项(乳胶法)操作规程POS

1、检测目的

乙型肝炎病毒标志物(HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb)检测。

2、测定原理

HBsAg检测采用双抗体夹心法原理,试剂含有被事先固定于膜上测试区(T区)的抗体。检测时,标本滴入试剂加样处,标本与预包被的乳胶颗粒(即标记物)结合的HBsAb(即标记抗体)反应,该结合物随之在毛细效应下向上层析。如就是阳性,乳胶抗体(标记抗体)在层析过程中先与标本中的HBsAg结合,随后结合物会被固定在T区膜上的HBsAb捕获,形成HBsAb标记抗体-HBsAg-HBsAb复合物,从而在T区形成一条红杠。如为阴性,则T区没有红杠。

HBsAb检测采用双抗原夹心法原理,试剂含有事先固定于膜上测试区(T区)的HBsAg。检测时,标本滴入试剂加样处,标本与预包被的乳胶颗粒结合的HBsAg反应(即标记抗原)反应,该结合物随之在毛细效应下向上层析。如就是阳性,乳胶抗原(标记抗原)在层析过程中先与标本中的HBsAb结合,随后结合物会被固定在T区膜上的HBsAg捕获,形成HBsAg标记抗原-HBsAb-HBsAg复合物,从而在T区形成一条红杠。如为阴性,则T区没有红杠。

HBeAg检测采用双抗体夹心法原理。试剂含有事先固定于膜上测试区(T区)的HBeAb。检测时,标本滴入试剂加样处,标本与预包被的乳胶颗粒结合的HBeAb反应(即标记抗体)反应,该结合物随之在毛细效应下向上层析。如就是阳性,乳胶抗体(标记抗体)在层析过程中先与标本中的HBeAg结合,随后结合物会被固定在T区膜上的HBeAb捕获,形成HBeAb标记抗原-HBeAg-HBeAb复合物,从而在T区形成一条红杠。如为阴性,则T区没有红杠。 HBeAg、HBcAb采用竞争抑制法原理,试剂含有事先固定于膜上测试区(T区)的抗体。检测时,标本滴入试剂加样处,随之标本在毛细效应下向上层析。如标本中含有相应的抗体,则同膜上测试区(T)的单克隆抗体竞争,与预包被在乳胶颗粒上的相应抗原反应。如标本中没有相应的抗体,则预包被在乳胶颗粒上的相应抗原与膜上测试区(T) 的单克隆抗体全部结合。 阳性标本,测试区(T)将没有红色条带;阴性标本,测试区(T)会出现明显的红色条带。

3、标本采集

样本采集后应尽快分离血清或血浆以避免溶血。检测进应尽量使用新鲜的样本。样本若不能及时送检,可在2-8℃冷藏3天。长期保存需冷冻于-20℃,忌反复冻融。发臭、溶血等异常样本请勿使用。

4、试剂

艾博生物医药有限公司 5、操作步骤

5、1 使用前将试剂板与血清／血浆标本恢复至室温 (20～30％)。从原包装铝箔袋中取出试剂盒(注意:在扣开铝箔前应先恢复至室温),在1小时内应尽快地使用。

5、2将试剂盒置于干净平坦的台面上,用吸管吸取血清／血浆标本,逐滴垂直加入于试剂板的 五个加样子 L中(每孔2-3 滴)。

5、3加样后立刻开始计时,等待红色条带的出现,在 15 分钟时读取测试结果。在 20 分钟后读 取的结果无效。

6、结果判定

由于前三个项目 HBsAg、HBsAb、HBeAg 使用双抗体(原)夹心法原理,后两个项日HBeAb、HbcAb 使用竞争法原理。因此前一:个项日与后两个项目判读方法就是不同的,请注意区别。

6、l、 HBsAg、HBsAb、HbeAg

6、1、1阳性(+): 两条红色条带出现。一条于测试区(T)内,另一条位于质控区(C)。阳性结果表明: 标本中含有待测物质。

6、1、2阴性(-):质控区(c)出现一条红色条带,在测试区(T)内无红色条带出现。 阴性结果表明: 标本中检测不出待测物质。

6、1、3无效:质控区(c)未出现红色条带,表明不正确的操作过程或试剂盒已经变质损坏。在 此情况下,应再次仔细阅读说明书,并用新的试剂盒重新测试。如果问题仍然存在,应立即停止使用此批号产品,并与当地供应商联系。

6、1、4注意:在进行 HBsAg、HBsAb、HbeAg 测试时,测试区(T)内的红色条带可显现出颜色深浅 的现象。只要在规定的观察时间内,不论该条带颜色深浅,即使只有非常弱的色带也应

该判为阳性结果。 6、2、HBeAb、HBcAb

6、2、1阳性(+):仅质控区(C)出现一条红色条带.在测试区(T)内无红色条带出现。阳性结果表明:标本中含有待测物质。

6、2、2弱阳性(+):质控区(C)出现一条红色条带,在测试区(T)内有非常弱的红色条带出现。阳性结果表明:标本中含有待测物质。

6、2、3阴性(-):两条红色条带出现。一条于测试区(T)内,另一条位于质控区(C)。阴性结果表明:标本中检测不出待测物质。

6、2、4无效:质控区(C)未出现红色条带,表明不正确的操作过程或试剂盒已经变质损坏。在此情况下,应重新测试。如果问题仍然存在,应立即停止使用此批号产品,并与当地供应商联系。

7、质量控制

7、1 请控制判读时间,测试结果应在测定开始后20分钟左右读取,30 分钟后读判定无效。 7、2 质控区内(C区)一条红色条带的出现就是试验结果可靠的前提。质控内(C)所显现的红色条带就是判定标本就是否足够,层析过程就是否正常的标准,同时也作为试剂的内控标准。