因表达载体时，首先要用同种限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子，以形成相同的黏性末端，其次还需要用DNA连接酶连接目的基因和载体从而形成基因表达载体——重组质粒。(2)油菜Tn基因的mRNA中的UGA变为AGA，则末端序列变为
—AGCGCGACCAGACUCUAA—，在拟南芥中，UGA是终止密码子不编码氨基酸，而在油菜中，UGA变为AGA后可编码一个氨基酸，同时CUC也可编码一个氨基酸，直到UAA终止密码子不编码氨基酸，所以Tn比t多编码2个氨基酸。所有生物共用一套遗传密码子，因此油菜Tn基因能在拟南芥突变体中表达。(3)由图可知重组质粒含有抗生素Kan抗性基因，所以导入重组质粒的受体细胞能在含有抗生素Kan的培养基上生长，若②不能在含抗生素Kan的培养基上生长，则说明重组质粒未导入。若③的种皮颜色为深褐色，则说明油菜Tn基因与拟南芥T基因的功能相同。(4)PCR扩增技术利用的是DNA复制的原理，DNA复制具有半保留复制的特点。由题意可知，若共用了引物62个，说明每一种引物用了31个，则2n-1=31，n=5，即目的基因扩增了5代。 答案：(1)重组质粒 限制酶和DNA连接 酶切割后具有相同的黏性末端
(2)2 所有生物共用一套遗传密码子 (3)重组质粒未导入(目的基因未成功表达) 深褐色 (4)5
【加固训练】(2015·天津二模)荧光素酶及其合成基因在生物研究中有着广泛的利用。
(1)荧光素酶基因常被用作基因工程中的标记基因，其作用是将
筛选出来。
(2)下表为4种限制酶的识别序列和酶切位点，下图为含有荧光素酶基因的DNA片段及其具有的限制酶切点。若需利用酶切法(只用一种酶)获得荧光素酶基因，最应选择的限制酶是 。 限 MspⅠ 制酶 酶切 位点 BamHⅠ MboⅠ SmaⅠ
(3)迄今为止，可将具有上述荧光素酶基因的载体导入动物细胞的技术中，应用最多的、最有效的是 。经一系列步骤，将所获得的胚胎早期培养一段时间后，再移植到雌性动物的 或子宫内，使其发育成为具有新性状的动物。
(4)荧光素酶在ATP的参与下，可使荧光素发出荧光。生物学研究中常利用“荧光素-荧光素酶发光法”来测定样品中ATP的含量。某研究小组对“测定ATP含量时所需荧光素酶溶液的最佳浓度”进行了探究。
【实验材料】1×10-8mol/L的ATP标准液、缓冲溶液、70 mg/L荧光素溶液(过量)、浓度分别为10、20、30、40、50、60、70的荧光素酶溶液(单位：mg/L)。
【实验结果】见图。
【实验分析与结论】
①实验过程：为使结果更加科学准确，应增设一组 作为对
照。除题目已涉及的之外，还需要严格控制的无关变量有 (至少写出一个)。
②实验结果：由图可知， 点所对应的荧光素酶浓度为最佳浓度。
【解析】(1)在基因工程中，标记基因的作用是将含有目的基因的受体细胞筛选出来。(2)比较各种酶切位点可知，限制酶SmaⅠ的酶切位点中包含限制酶
MspⅠ的酶切位点，而且限制酶SmaⅠ和MspⅠ分别位于荧光素酶基因的两侧，若只用一种酶获得荧光素酶基因，最应选择的限制酶是MspⅠ。(3)将具有荧光素酶基因的载体导入动物细胞(通常为受精卵)，常采用显微注射技术。正常情况下，受精过程发生在雌性动物的输卵管内，受精卵形成后即在输卵管内开始发育、进行有丝分裂，并且向子宫方向移动，因此，可将基因工程中获得的胚胎培养一段时间后，再移植到雌性动物的输卵管或子宫内，使其发育成为具有新性状的动
物。(4)①依题意可知，该实验的目的是“测定ATP含量时所需荧光素酶溶液的最佳浓度”，自变量是不同的荧光素酶溶液的浓度，因变量是样品中荧光素发出荧光的强弱，只有与不加荧光素酶溶液的一组对照，实验才更具有说服力，所以应增设一组浓度为0 mg/L的荧光素酶溶液作对照。除了自变量外，凡是对实验结果有影响的因素都属于无关变量，如温度、反应时间、加入液体的量等，需要严格控制。②坐标图显示，荧光素酶浓度低于40 mg/L时，随荧光素酶溶液浓度的增加，试管中荧光强度逐渐增加，当达到40 mg/L时，荧光强度不再随荧光素酶溶液浓度的增加而增加，所以，d点所对应的荧光素酶浓度为最佳浓度。
答案：(1)含有目的基因的细胞 (2)MspⅠ (3)显微注射技术 输卵管
(4)①0 mg/L荧光素酶溶液 温度(反应时间) ②d
7.(22分)(2015·天津高考)纤维素分子不能进入酵母细胞。为了使酵母菌能够利用环境中的纤维素为原料生产酒精，构建了含3种不同基因片段的重组质粒。下面是酵母菌转化及纤维素酶在工程菌内合成与运输的示意图。
相关推荐：
loading