实验一、氨基酸纸层析分离鉴定

实验一 氨基酸的分离鉴定————纸层析法

一 预习思考题

1.本实中滤纸的作用是什么？

2.实验中作为固定相和流动相的物质分别是什么？ 3.Rf值的含义。影响因素？

4.两Rf值之差为多少范围内可以确定为同一物质？ 5.层析滤纸和普通滤纸有什么区别？

6.为什么要平衡？平衡剂和扩展剂是同一物质吗？ 7.用手直接接触滤纸会引起什么不良后果，为什么？ 8.缝制的纸筒如果两边缘相靠会造成什么后果？

9.为避免实验结果出现“拖尾”现象，实验操作中应注意哪些环节？

10.标记滤纸不能使用油性笔，为什么？ 11.查阅资料，解释纸层析分离氨基酸原理。

1.纸层析是以滤纸为惰性支持物的分配层析，滤纸纤维上的羟基具有亲水性，吸附一层水作为固定相。 2.以水相为固定相，展开的溶剂作流动相。

3.溶质在滤纸上的移动速度用Rf值表示：

展开斑点中心与原点之间的距离/溶剂前某种沿与原点之间的距离

影响因素：在一定条件下某种物质的Rf值是常数。Rf值的大小与物质的结构性质，溶剂系统，层析滤纸的质量，温度，样品溶液中的杂质等因素有关。

4.样品分离各组分一般Rf值在05~0.85之间，彼此间差值不应0.05，样品与标准差值<0.05基本确认为同一物质。

5.层析滤纸，组成该滤纸的纤维素是亲水物质，能形成水相和展层溶剂的两相系统，被分离物质在两相中的分配保持平衡关系。纸层析用于分析简单的混合物时可做单向层析。对于复杂的混合物，可做双向层析。普通滤纸，由棉质纤维组成，按不同的用途而使用不同的方法制作。由于其材质是纤维制成品，因此它的表面有无数小孔可供液体粒子通过，而体积较大的固体粒子则不能通过。这种性质容许混合在一起的液态及固态物质分离。 6.使分离物质在溶剂中的分配较恒定，得到的斑点较圆整。 7.因为人的皮肤表面也有氨基酸，如果直接接触， 会干扰实验。 8.两边缘相靠导致滤纸的厚度不均，溶剂在滤纸上的移动速度不一致，影响实验结果。

9.点样时点完一点应干燥后在滴，以保证每点在纸上扩散的直径最大不超过3mm。

10.油性笔标记会溶与层析液，影响实验结果。

11.纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法，纸层析所用展层溶剂大多由有机溶剂和水组成。其中滤纸纤维素上吸附的水是固定相，展层用的有机溶剂是流动相。在层析时，将样品在距滤纸一端约2~3cm的某处，该点为原点；然后在密闭容器中层析溶剂沿滤纸的一个方向进行展层，这样混合氨基酸在两相中不断分配，由于分配系数不同，即不同氨基酸在相同的溶剂中溶解度不同，所以利用在滤纸上迁移速度不同分离氨基酸不同，氨基酸随流动相移动的速率就不同，结果他们分布在滤纸的不同位置上而形成距原点距离不同的层析点。物质被分离后在纸层析图谱上的位置可用Rf值来表示。