霉菌毒素检测方法综述

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霉菌毒素检测方法综述

由于产生毒素的霉菌无处不在，以及我们对大多数有利于霉菌生长和霉菌毒素产生的条件控制不力，造成食品和饲料的霉菌毒素污染问题越来越成为现代农业生产中不可忽视的重大难题。在各种农产品上生长着的各种各样的霉菌，这些霉菌都能产生霉菌毒素，霉菌毒素是有毒的化合物，有些甚至是致癌的。霉菌毒素有很多种(CAST,2003)，包括黄曲霉毒素，主要是黄曲霉毒素B1和M1(Aflatoxins，FB1、FM1)；赭(棕)曲霉毒素A(OchratoxinA，OA)；杂色(柄)曲霉毒素(Terigmatocystin)；展青霉素(Patulin,PTL)；玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN(F－2));串珠镰刀菌素(Moniliformin,MF)，三硝基丙酸以及属于单端孢霉烯族化合物(Trichothecenes)的T－2毒素(T－2toxin,T－2)；脱氧雪腐镰刀菌烯醇(呕吐毒素)(Deoxynivalenol,DON)；二乙酰镳草镰刀菌烯醇(Diacetoxyscirpenol，DAS)等。

联合国粮农组织在近期的报道中指出，全世界至少99个国家，占世界人口的87％，针对粮食和饲料的霉菌毒素污染问题都有相关的规定。在未来的几年里，与不断变化的全球气候有关的气象突发事件的增多将进一步向我们提出挑战。霉菌毒素污染给食品企业、粮油加工企业、畜禽养殖场以及饲料的加工企业造成了巨大的经济损失。

目前霉菌毒素检测常用的方法如下几种：

一、 薄层层析法：

TLC法是针对不同的样品，用适宜的提取溶剂将霉菌毒素从样品中提取出来，经柱层析净化，再在薄层板上层析展开、分离，利用霉菌毒素的荧光性，根据荧光斑点的强弱与标准比较测定其最低含量。TLC法样品前处理繁琐，且提取和净化效果不够理想，提取液中杂质较多，在展开时影响斑点的荧光强度。

二、色谱法：

色谱法，包括薄层色谱、气相色谱、液相色谱等，一直是最重要的霉菌毒素的化学分析方法。现在比较普遍的霉菌毒素的分析方法还是液相色谱法，包括液相色谱-质谱联用技术。该法快速而准确，但需要昂贵的仪器设备，仅限于专业检测机构获得科研和调查分析、监测使用，未能在企业及基层广泛推广使用，而且其结果的滞后效应大大降低了对生产实际的指导效果。

三、免疫化学检测法： (胶体金免疫层析法，酶联免疫吸附法)

免疫学检测方法是基于抗体与抗原或半抗原之间的选择性反应而建立起来的一种生物化学分析法。通常具有高的选择性和很低的检出限，广泛用于各种抗原、半抗或抗体的测定，一般可分为荧光免疫法、

发光免疫法、免疫法及电化学免疫法等非放射免疫法和放射免疫法，其中在饲料霉菌毒素检测中应用较广的主要是酶联免疫吸附法(ELISA)和胶体金免疫层析法。 免疫学检测方法由于其快速、灵敏、准确、可定量、操作简便、无需贵重仪器设备，且对样品纯度要求不高等特性，特别适用于饲料厂、粮油/食品加工厂、养殖场等企业进行原料或成品的检测以及工商质监部门现场检测。 该类方法有以下特点： 1) 灵敏度高 2) 干扰小：抗体抗原的免疫反应特异性很强，结构类似物、荧光物质、有色物质对检测的干扰很小。 3) 操作简便快捷：由于特异性强，简化了样品的预处理和提取纯化过程，同时操作步骤也非常简便，测定时间也短。 4) 安全性高，污染少，成本低廉：不需要昂贵的测定仪器，所用试剂也相对较少，特别是因为灵敏度高，毒素标准品的浓度可以很低，减少了对检测人员和环境的潜在危害和污染。 几种检测霉菌毒素方法特点对比表 常用方法 检测操作 是否定量 敏感性 提取效率 仪器设备 样本前处理 几种霉菌毒素快速检测方法对比 方法名称 优点 1、简便快速，5分钟出结果 2、样品处理时间非常短 胶体金快捷型--直接法 3、携带方便，适用基层 4、可以单个样品逐一检测，不需要做曲线 5、无需复杂设备和专业知识，操作人员5分钟即可学会，即学即用 6、室温保存，保存期长 给具体数据 2、检测样品范围较窄，不能测含油较多的样品 3、用于提取的溶剂为甲醇，有一定的毒性 4、检测高灵敏度时稳定性弱于胶体金精准型 局限性 1、定性检测，只判断超不超标，不a.饲料生产加工企业 b.粮食谷物粗加工企业 c.工商质监部门用于快速筛查 d.畜禽养殖户自查 适用单位 薄层层析法 繁琐 目测半定量 差 低 设备简单 繁琐 色谱法 繁琐 定量 高 高 设备昂贵 繁琐 胶体金免疫层析法 简单 定性 高 高 简单设备 简单 酶联免疫吸附法 简单 定量 高 高 简单设备 简单 1、与HPLC法对照，准确性非常好，有权威检测中心验证报告 2、检测样品范围非常广，凡是可能污染霉菌毒素的样品(包括油类)，均可用于检测 3、整个操作过程所使用的试剂均无毒无害 胶体金精准型--萃取复溶法 4、样本中毒素提取回收率高且稳定 5、样品本身颜色对检测结果影响小 6、可以通过调整稀释倍数准确地检测多个浓度梯度，可实现半定量检测 7、操作较简单，一般操作人员半小时即可学会，即学即用 8、室温保存，保存期长 1、准确定量，有权威机构验证报告 酶联免疫试剂盒Elisa 2、批量样品，一次检测 3、采用直接竞争法，步骤简单 4、灵敏度高于胶体金法，检测范围广 1、操作较复杂，需要专业人员操作 2、保存温度有限制，保存期一年 3、不适合基层现场检测 4、检测样品范围较窄，对于含油较多的样品，需另行设计样本处理方法 1、定性检测，只判断超不超标，不给具体数据 2、操作时间比快捷型长 3、操作步骤多于快捷型 4、一张试纸只能测一份样品 a.粮油制品生产加工企业 b.食品加工贸易企业 c.香料调味品生产加工企业 d.食用油生产企业 e.国家/省市县级粮油监督检测中心(站) f.工商质监部门用于市场快速筛查 g.饲料生产加工企业 h.其他需检测霉菌毒素的行业 a.食品相关分析实验室 b.粮油监测检测中心 c.有条件的粮油饲料生产加工企业 5、检测值基本不受样品底色干扰 以上两表对比了各种方法的优缺点以及各种单位最实用的检测方法分析，希望能对关注霉菌毒素的企业和单位有所帮助，但是同行业也可以从经济成本和样品不同要求出发也有可以找到最适合自己企业适用的检测方法。 下表中针对食品和饲料行业中不同的原料推荐了相应的初筛方法： 食品行业黄曲霉毒素初筛方法 推荐检测方法 品名 胶体金快捷型---直接检测法 玉米及其制品 花生及其制品 食用油 粮食发酵酒 胶体金精准型--萃取复溶法 酶联免疫试剂盒Elisa 品名 胶体金快捷型---直接检测法 玉米 大豆、豆粕 其他饲料 饲料行业黄曲霉毒素初筛方法 推荐检测方法 胶体金精准型--萃取复溶法 酶联免疫试剂盒Elisa P P P P P P P P P 谷物(大米、小米、小麦、燕麦、黑麦、荞麦、高粱等) 调味品(辣椒粉、胡椒粉等) 酱油、醋 坚果类 冷冻类速食品 P P P P P P P