实验室分子生物学实验基本操作规范及注意事项
一、酶与载体的分装
酶类与载体：T载体(50 ng/μl)用灭菌水稀释4倍（12.5 ng/μl）后分装成10 μl或20 μl；
连接酶（solutionΙ）按5 μl分装； dNTP（10 mM） 分装成50 μl； 无菌水分装成1 ml；
注意：（1）所有分装都必须用已灭菌的管。
（2）所有工具酶和载体的使用过程均在冰浴中进行。
（3）工具酶、载体以及试剂盒等实验室共用物品，用完后必须及时放回
原处，以免耽误他人使用。
（4）当你发现你使用的是最后一管（盒）公用物品时，请马上告知负责
人购买，以免耽误使用。
（5）感受态，氨苄青霉素和IPTG由研究生轮流负责制备。每人负责六个月。其他试剂则由第一位使用新包装的同学分装。由于分子实验工具酶比较容易失活，必须在冰上进行分装。
二、常见抗生素及IPTG的配置
以氨苄青霉素为例：
1．准备足够量的1.5 ml的EP管、两个100 ml的离心管、0.22 μm水系滤器、注射器、蒸馏水，以上用品均要进行高压灭菌。 2. 洁净工作台紫外灭菌，然后进行以下操作。
3．称取2 g的氨苄青霉素粉末于离心管中，加入灭菌水至总体积为20 ml，轻摇离心管，至氨苄青霉素粉末完全溶解，以免过滤时堵塞滤膜。
4．用注射器吸取配制好的溶液，然后把滤器安在注射器上，缓缓推动注射器活塞，把溶液经滤膜推至100 ml的离心管中。
注意：动作要缓和，使滤出液出口正对着离心管，还要防止染菌。
5．把100 ml离心管中已除菌的氨苄青霉素溶液分装到1.5 ml的EP管中，每管0.5 ml。在EP管上做好标记，包括名称、浓度、日期等。 6．把做好标记的盛有氨苄青霉素的EP管于-20℃保存。
注意：当你发现你使用的是最后一管抗生素时，请马上告知有关人员及时配制，以免耽误使用。
表1.常见抗生素的储存浓度及工作浓度
名称
氨苄青霉素（ampicillin） 卡那霉素（kanamycin） 氯霉素（chloramphenicol） 链霉素（streptomycin） 四环素（tetracyyline） IPTG
储存浓度 100 mg/ml 10 mg/ml 25 mg/ml 50 mg/ml 10 mg/ml 1 M
工作浓度
50 μg/ml～100 μg/ml 10 μg/ml～50 μg/ml 12.5 μg/ml～25 μg/ml 10 μg/ml～50 μg/ml 10 μg/ml～50 μg/ml 0.05-0.6 mM
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