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动物遗传育种Chapter 19 育种实践中的分子标记技术

来源:用户分享 时间:2025/6/13 6:33:34 本文由loading 分享 下载这篇文档手机版
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第一节 分子标记的类型与原理 ?2、分子标记的类型 ?以PCR为基础的分子标记: ?随机扩增多态DNA(random amplified polymorphic DNA, RAPD) 扩增片段长度多态性(amplified fragment length polymorphism, AFLP) ??

简单重复序列多态性(simple sequence repeat, SSR) 单链构型多态性(single strand conformation polymorphism, SSCP)

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第一节 分子标记的类型与原理 ?2、分子标记的类型 ?以DNA序列为核心的分子标记: ?转录间隔区(如internal transcribed spacer, ITS)、线粒体序列(如COI、16S rDNA)测序分析技术 ?单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism, SNP)

Polymerase Chain Reaction(PCR)

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PCR技术的基本过程:

模板DNA的变性:模板DNA经加热至94℃,使模板DNA双链解离成为单链; 模板DNA与引物的退火(复性):温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链依照碱基互补配对原则结合;

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引物的延伸:DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP为反应原料,目标序列为模板,按碱基互补配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链。

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重复循环变性--退火--延伸三过程。

Materials needed for PCR

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Target DNA (the DNA you want to copy) Free Nucleotides (A, T, C, G) Primers (DNA primers, not RNA)

Taq Polymerase (heat stable DNA Polymerase III) Mg2+ (cofactor that DNA Polymerase III needs to work) Buffer

Thermocycler (machine that changes temperatures)

琼脂糖电泳 Gel Electrophoresis

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琼脂糖是一种天然聚合长链状分子,可以形成具有刚性的滤孔,凝胶孔径的大小决定于琼脂糖的浓度。

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DNA分子在碱性缓冲液中带负电荷,在外加电场作用下向正极泳动。

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DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时,有电荷效应与分子筛效应。不同DNA的分子量大小及构型不同,电泳时的泳动率就不同,从而分出不同的区带。

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