DNA测序仪原理及应用 - 图文

双脱氧链末端终止法特点

双脱氧链末端终止法不仅具有化学测序法的优点，而且更适用于大规模的测序。但它要求有一个纯净的单链DNA模板和一个合成反应所需的特异性的引物。因此，早期的工作仅局限于单链噬菌体为模板，若干个不同的特定限制性内切酶酶解片段为引物，在模板链的不同部位引导合成，从而确定出噬菌体DNA的核酸序列。然而，对于大量存在着的天然双链DNA分子，因没有良好的制备产量和质量高的分离链的技术，而限制了双脱氧链末端终止法的应用程度。

经典的双脱氧链末端终止法

测序技术的改进

标记物方面的改进：由于放射性同位素对人

体的危害，许多实验室开始利用非放射性物质来取代放射性同位素。如生物素、地高辛、银染法、荧光标记物等化学发光物。在双脱氧法测序时，它们作为标记物，示踪测序反应的产物，最后通过酶显色反应或者荧光信号显示出测序的结果。这些方法比传统的放射性同位素方法检测容易、安全、快速、费用也低。

经典的双脱氧链末端终止法

测序技术的改进

电泳方法的改进:电泳方法的改进主要采用毛细

管电泳法。毛细管电泳是被分离物质在毛细管中的电泳。1992年，Matnies等首先提出陈列毛细管电泳法，采用激光聚焦荧光扫描检测装置。25只毛细管并列电泳，每只毛细管在1.5小时内可读出350bp。DNA序列分析效率可达6000bp/h 。

DNA测序仪测序原理

双脱氧链末端终止法测序基本原理示意

Sanger DNA测序仪的发展历程

??1977: Sanger DNA法测序概念被提出

??1986:Hood and Smith 荧光标记ddNTP被用于电泳??1987:第一台自动测序仪产生

??1990:毛细管电泳被应用在DNA测序上??2003:人类基因组测序工作完成

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