分子生物学研究方法(下)

第六章

分子生物学研究法（下）——基因功能研究技术

基因功能的研究思路主要包括:1. 基因的亚细胞定位和时空表达谱; 2. 基因在转录水平的调控；

3. 细胞生化水平的功能研究：对该基因的表达产物做一个细胞信号转导通路的定位；

4. gain-of-function & loss-of-function: 分别在细胞和个体水平，做该基因的超表达和敲除，从表型分析该基因的功能。

功能研究应从完整的分子-细胞-个体三个层次研究，综合分析。

本章内容

?基因表达研究技术?基因敲除技术

?蛋白质及RNA相互作用技术?基因芯片及数据分析?利用酵母鉴定靶基因功能?其他分子生物学技术

6.1 基因表达研究技术6.1.1 基因表达系列分析技术6.1.2 RNA的选择性剪接技术6.1.3 原位杂交技术6.1.4 基因定点突变技术

6.1.1 基因表达系列分析技术

基因表达系列分析技术（serial analysis of gene expression，SAGE）是1995年由Velculescu等建立的技术，在整体水平上对细胞或者组织中的大量转录本同时进行定量分析，而无论其是否为已知基因。9概念：

以DNA测定为基础定量分析全基因组表达模式的技术，能直接读出任何一种细胞类型或组织的基因表达信息。