新吉尔灭消毒剂消毒验证实验报告 - 图文

新吉尔灭消毒剂消毒验证实验报告

一 目的

根据实际生产与微生物实验操作过程中，选用消毒剂（75%酒精、0.5%新吉尔灭消毒液）符合使用要求而进行的检验及现场验证，验证对代表菌种有效消灭情况进行确认。

二 实验准备

2.1 消毒剂：75%酒精、0.5%新吉尔灭消毒液

2.2 代表菌种：大肠杆菌、白色念珠菌、金黄色葡萄球菌 2.3 缓冲液：0.9%生理盐水：称取9g氯化钠，溶解于1000ml纯化水中，分装，121℃、15min压力蒸汽灭菌后备用。

2.4 培养基：营养琼脂培养基、马铃薯葡萄糖琼脂、乳糖胆盐培养基

三 菌悬液配制

3.1 菌悬液的制备（菌种不得超过5代，采用适宜的方法保存） 3.1.1取金黄色葡萄球菌加入10ml0.9%无菌氯化钠溶液，将菌种脱落，吸出菌液至无菌试管内，制成均匀菌液（菌液浓度不得低于10-6cfu/ml)。

3.1.2取白色念珠菌新鲜培养物少许至马铃薯葡萄糖琼脂上，在26℃生化培养箱中培养2天，加入10ml0.9%无菌氯化钠溶液，将菌种洗脱。然后吸出菌液至无菌试管内，制成均匀的菌液（菌液浓度不得低于10-6cfu/ml）。

3.1.3 取大肠埃希菌加入100ml双料乳糖胆盐中在37℃培养箱

中培养2天制得悬菌液，吸出菌液至无菌试管内，制成均匀菌液（菌液浓度不得低于10-6cfu/ml）。

3.1.4将上述培养物用稀释液稀释至所需浓度备用，以生长菌落每平板为100cfu以内者为宜。 3.2 消毒剂的验证

3.2.1 验证消毒剂的配制与准备工作

75%酒精：根据公司实际情况采购备用。

0.5%新吉尔灭消毒液：根据试剂说明取原液，加入纯化水溶解，分装，121℃、15min压力蒸汽灭菌后备用。

取10ml消毒剂（75%酒精、0.5%新吉尔灭消毒液）分别注于无菌试管中。每组平行两管。

3.2.2试验步骤

3.2.2.1 大肠杆菌实验步骤

取大肠杆菌增值培养物0.2ml，接种于已有消毒剂试管中，轻轻摇动，作用10min，十分钟后，吸取此混合液1ml加入无菌培养皿中，注入15-20ml温度不超过45℃的溶化营养琼脂培养基，混匀，36±1℃培养48h后计数，平行2组。

重复上述操作，完成3次试验

3.2.2.2 按照上述方法进行金黄色葡萄球菌、白色念珠菌的操作,但白色念珠菌操作时，应使用马铃薯葡萄糖培养基，并且在26±1℃培养3天计数。

四 阴性、阳性对照

4.1 阴性：按要求浓度的消毒剂10ml和已灭菌10ml 0.9%氯化钠混合液，吸取此混合液1ml加入无菌培养皿中，注入15-20ml温度不超过45℃的溶化营养琼脂培养基/马铃薯葡萄糖培养基。 4.2 阳性:菌悬液稀释至所需浓度，接种于平皿中，平行两组。

五 培养及计数

大肠杆菌、金黄色葡萄球菌接入营养琼脂培养基中，白色念珠菌接入马铃薯葡萄糖培养基。含菌膜向上。放入所需恒温培养箱中培养3-5天后计数。

试验菌 稀释级数 5.1菌液稀释计数表 计数结果cfu/皿 平均值 65 68 31 74 61 24 69.5 64.5 27.5 浓菌液菌数cfu/ml 6.95×107 6.45×107 2.75×107 金黄色葡萄10-6 球菌 大肠杆菌 10-6 白色念珠菌 10-6

试验菌稀释级数为10-6能肉眼读数并且符合标准。每块平皿含菌量不低于106cfu/ml，符合验证要求。

5.2菌落计数表

试验菌 结果 平皿一（10-6cfu/ml) 平皿二（10-6cfu/ml) 平均值（10-6cfu/ml) 菌落总数

金黄色葡萄球菌 59 64 61.5 61500000 大肠杆菌 52 43 47.5 47500000 白色念珠菌 43 26 34.5 34500000 消毒液消毒效果验证结果：

混合液 结果 试验一 试验二 试验三 阴性对照 杀菌率 大肠杆菌 0 0 0 0 100 5.3菌落计数表 白色念珠菌 0 0 0 0 100% 金黄色葡萄球菌 0 0 0 0 100%