石蜡包埋切片方法

石蜡包埋组织样品制备方法

组织采集后，经固定、保存、石蜡包埋、切片、展片、烤片，方可进行HE染色（或其它化学染料染色）及免疫抗体标记。以下操作依据组织大小及致密程度而定

1、组织的采集、固定和保存：

可依据实验目的及组织的特点而考虑采用不同的固定和保存方法。此处只介绍实验室常用方法。

采取组织后，4%多聚甲醛（4%PFA）4C固定1小时（根据组织大小和致密程度调整固定时间）或过夜，PBS缓冲液洗三次，每次10min至1小时，于30%、50%乙醇中各10 min至1小时，4

C保存于70%乙醇中。

2、组织的包埋、切片、展片及保存：：固定后的样品经梯度乙醇脱水、二甲苯透明，52-54C石蜡包埋，常规切片，切片厚4 -10净载玻片上，34C烤片过夜，之后收集于载片盒中，4

石蜡包埋：

保存于4C 70%乙醇中的组织样品min

100%乙醇15min

石蜡

石蜡30 min

（1） 1.5hr（2） 1.5- 2.5hr

石蜡

4C保存 石蜡

80%乙醇15 min

95%乙醇15

二甲苯

m，贴于处理过的干C密封保存。

2乙醇二甲苯15 min二甲苯透明5-10 min

（3）包埋

3、石蜡组织切片的免疫标记：

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切片经二甲苯脱蜡、梯度乙醇复水，即可进行免疫反应，操作步骤与冰冻组织切片的反应方法相同。

石蜡组织切片脱蜡、复水步骤： xx保存于4C的组织切片二甲苯 (1)10 min(2)10 min(3)10 min5 min

二甲苯 二甲苯

二甲苯乙醇15 min

100%乙醇5 min

95%乙醇5 mind

80%乙醇

70%乙醇5 min50%乙醇5 min30%乙醇5 min

2H 2O5 min

4、石蜡组织切片的HE染色：

切片经二甲苯脱蜡、梯度乙醇复水，于苏木精中室温染色5-20min，迅速用水冲洗切片，至组织切片变蓝，镜检。用

0.1-

0.5%盐酸乙醇分色1～2秒钟，也可用50ml H

2O中加一滴氨水分色，效果亦好（如染色程度恰好，也可省略分色步骤）。之后用流水冲洗切片，直至切片变蓝，此称蓝化。切片经梯度乙醇至95%乙醇中，于

0.5%伊红中染色1～5秒或更长时间，95%乙醇洗去残色，若颜色太深，可在低浓度的乙醇中脱色，镜检。无水乙醇脱水、二甲苯透明，中性树胶封片。普通光镜观察，室温干燥条件下保存染色切片。

石蜡切片经二甲苯脱蜡、梯度乙醇复水2O迅速冲洗

苏木精室温5-10 min

H

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0.1%盐酸乙醇1-2 sec醇1 min30sec

80%乙醇1 min无水乙醇1 min

流水滴洗30%乙醇1 min50%乙醇1 min

伊红B液1-

70%乙

95%乙醇1 min无水乙醇5min

伊红A液1min

2乙醇二甲苯15 min二甲苯

(1)5min(2)5min(3)5min

二甲苯 二甲苯

中性树胶封片，室温干燥保存

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