野油菜黄单胞菌控制hrpG hrpX表达的调节基因的鉴定

野油菜黄单胞菌控制hrpG hrpX表达的调节基因的鉴定

野油菜黄单胞菌控制庇伊G、庇彬表达的

调节基因的鉴定

摘要

J}l伊(hypersensitiVe reaction and pathogenicity)基因决定着病原细菌物的致病性和诱导非寄主植物过敏反应。在野油菜黄单胞菌致

病变种(物，z历D胁绷口s册唧船舫pv．c口叩船姚，勋c)中，^伊G、^帜是目前已鉴定出的控制^伊基因表达的关键调节基因，而关于矗巾G、J}l帜 上游的调节基因几乎一无所知，因此，鉴定控制J}zpG、Jll秘表达的调节 基因，对于研究矗节基因的表达调控机制，揭示植物病原细菌的致病机 制都具有重要意义。

本研究利用蔗糖敏感型自杀基因船谚作为报告基因，将报告质粒

埝口c锄彬和pL白口c励伊G通过三亲本接合的方法导入揿8004功能注释为调节基因的253个突变体，从中筛选出6个候选调节基因翔∞799、 Xc2253、xc3056、xcl734、xc2650昶xc225l：·

在初步获得6个候选调节基因的基础上，本研究又利用缈基因作为报告基因，建立了GUS报告系统加以验证。首先构建获得GUS报告p“咖妫彬和pH咖JIl伊G，然后将它们与另外两个GUS报告质粒和pLGG通过三亲本接合的方法分别导入上述候选基因对应的突 变体(073G12、125H08、151D11、NKl668、PK2558和NK2168)，在

MMX培养基中检测GUS活性。结果显示，与野生型妇8004相比，突变体073G12、125H08、151D11、NKl668和NK2168中^印G、^啊搿基l

对寄主植

p

质粒

pLGX

因的表达量(即GUS活性)均表现为显著降低，表明这5个突变体所对

应的基因瑚口7约、嬲225罗、獭一3仿6、二鼢刎和肥225J正向调控^印G、

J}z帜基因的表达，而突变体PK2558对应的基因恩一265D非正向调控 ^伊G、，i彬基因的表达。

通过功能反式互补，构建获得调节基因嬲225岁的突变体125H08和 船3∞6的突变体151D11的互补菌株，然后进行突变体及互补菌株的表 型检测。结果表明，撒n2聊和艇3∞6这两个调节基因都可影响‰c的

致病能力，但基本上不影响‰c诱导辣椒EC时10R的过敏反应，也不影 响融胞外多糖的分泌及胞外蛋白酶、淀粉酶和纤维素酶的活性；调节 基因配225罗可影响融的游动性及生物膜的形成，而另一调节基因

獭乃∞6不影响殷c的游动性及生物膜的形成。

关键词：野油菜黄单胞菌^伊G^彬调控期胡

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