C．融化琼脂时不能使培养基溢出或烧焦
D．灭菌时一般用高压蒸汽灭菌锅在121 ℃，500 g/cm2 压力下灭菌15分钟
(2)该同学利用上述制备的培养基来检测水样中的细菌数量，他所选择的分离方法应是____________；该同学在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是____________________________。接种在超净工作台上进行，实验前一段时间需打开工作台上的紫外灯和过滤风，实验中需关闭的是____________(A.酒精灯 B．照明灯 C．紫外灯 D．过滤风)。
(3)值得注意的是，他所选择的这种方法统计的结果往往比实际细菌的数目要低，这是因为①__________________________；②_________________________________________
________________________________________________________________________。 (不考虑实验操作原因引起的细菌数目的变化)
(4)该同学欲将所分离出的某种细菌临时保藏，应接种到试管的____________培养基上，等菌落长成后，放入冰箱低温保藏。
解析：培养基应先调pH再进行灭菌，A正确；培养基应先灭菌再分装到培养皿中，B正确；融化琼脂时不能使培养基溢出或烧焦，C正确；灭菌时一般用高压蒸汽灭菌锅在121 ℃，1000 g/cm2压力下灭菌15分钟，D错误。
答案：(1)D (2)(稀释)涂布分离法 检查平板灭菌是否彻底 C
(3)①该方法只能统计样品中活菌的数目，死菌无法统计 ②当两个或多个细菌连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 (4)斜面
4．(2020·杭州模拟)从土壤中分离以尿素为氮源的细菌，实验过程如图所示，请回答下列问题：
土样―→土壤浸出液―→稀释―→接种―→培养、观察
(1)欲从土壤中分离出能分解尿素的细菌，将土壤用________进行一系列的梯度稀释，同一浓度的土壤稀释液至少涂布________个平板。
(2)在培养基中加入尿素(唯一氮源)，以分离出能分解尿素的细菌，这种加入尿素的培养基在功能上属于________。
A．选择培养基 B．固体培养基 C．液体培养基 D．半固体培养基
(3)接种后的培养皿________放于37 ℃的恒温箱中培养。在能利用尿素的细菌菌落周围，有红色环带出现的原因是______________________________________________________
________________________________________________________________________。 (4)为了提高尿素肥效，可以将分解尿素的酶和尿素混合，制成“加酶尿素”。水培某植物时，为了提高“加酶尿素”中酶的利用率，可采用________技术。
解析：(1)稀释时，为减少杂菌干扰，需要用无菌水稀释。为排除偶然因素，每个稀释度需要涂布3个平板。(2)以尿素为唯一氮源的培养基在功能上属于选择培养基。(3)培养时，为防止培养皿盖上的冷凝水滴落冲散细菌，需要将培养皿倒置。能利用尿素的细菌可分泌脲酶，脲酶能将培养基中的尿素分解，产生的氨使指示剂酚红呈红色。(4)固定化酶技术使酶可以回收，从而提高了酶的利用率。
答案：(1)无菌水 3 (2)A (3)倒置 能利用尿素的细菌可分泌脲酶，脲酶能将培养基中的尿素分解，产生的氨使指示剂呈红色 (4)固定化酶
5．已知一种有机物X(仅含有C、H两种元素)不易降解，会造成环境污染。某小组用三种培养基筛选土壤中能高效降解X的细菌(目标菌)。
Ⅰ号培养基：在牛肉膏蛋白胨培养基中加入X(5 g/L)。
Ⅱ号培养基：氯化钠(5 g/L)，硝酸铵(3 g/L)，其他无机盐(适量)，X(15 g/L)。 Ⅲ号培养基：氯化钠(5 g/L)，硝酸铵(3 g/L)，其他无机盐(适量)，X(45 g/L)。 回答下列问题：
(1)在Ⅰ号培养基中，为微生物提供氮源的是________。Ⅱ、Ⅲ号培养基中为微生物提供碳源的有机物是________。
(2)若将土壤悬浮液接种在Ⅱ号培养基中，培养一段时间后，不能降解X的细菌比例会________，其原因是__________________________________________________________
________________________________________________________________________。 (3)Ⅱ号培养基加入琼脂后可以制成固体培养基，若要以该固体培养基培养目标菌并对菌落进行计数，接种时，应采用的方法是________________________________________。
(4)假设从Ⅲ号培养基中得到了能高效降解X的细菌，且该菌能将X代谢为丙酮酸，则在有氧条件下，丙酮酸可为该菌的生长提供____________和______________________。
解析：(1)牛肉膏蛋白胨培养基中，牛肉膏、蛋白胨为微生物提供了氮源，而Ⅱ号、Ⅲ号培养基中除X外的其他物质均不含碳，所以能为微生物提供碳源的有机物是X。(2)因为Ⅱ号培养基中碳源只有X，相当于选择培养基，只有能降解X的细菌才能增殖，而不能降解X的细菌因缺乏碳源不能增殖。(3)要对菌落进行计数，应采用稀释涂布平板法进行接种。(4)在有氧条件下，丙酮酸参与细菌的需氧呼吸，可以为该菌的生长提供能量和合成其他物质的原料。
答案：(1)牛肉膏、蛋白胨 X
(2)下降 不能降解X的细菌因缺乏碳源不能增殖，而能降解X的细菌能够增殖
(3)稀释涂布平板法
(4)能量 合成其他物质的原料
6．(2020·宁波一模)某化工厂的污水池中含有一种有害的难以降解的有机化合物A。研究人员用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成功筛选到能高效降解化合物A的细菌(目的菌)。实验的主要步骤如图所示。请分析回答下列问题：
(1)培养基中加入化合物A的目的是____________________________，这种培养基属于______培养基。
(2)“目的菌”生长所需的氮源和碳源是来自培养基中的________。实验需要振荡培养，由此推测“目的菌”的代谢类型是________。
(3)在上述实验操作过程中，获得纯净“目的菌”的关键是______________________。 (4)转为固体培养基时，常采用划线分离的方法进行接种，此过程中所用的接种工具是__________，操作时采用________灭菌的方法。
解析：(1)在选择培养基中加入特定物质，可以筛选出特定的细菌。(2)根据题目所给的培养基配方，“目的菌”生长所需的氮源和碳源只能来自培养基中的化合物A。异养需氧型细菌在培养时需要振荡。(3)获得纯净特定“目的菌”的关键是防止外来杂菌入侵。(4)用划线分离的方法进行接种，接种工具是接种环，操作时一般采用灼烧灭菌。
答案：(1)筛选目的菌 选择 (2)化合物A 异养需氧型 (3)防止外来杂菌入侵 (4)接种环 灼烧
7．急性肠胃炎、手足口病分别是由细菌和病毒通过消化道进入人体导致的，因此检验饮用水的细菌含量和病毒含量是有效监控疾病发生的必要措施。请回答下列与检验饮用水有关的问题：
(1)在如图所示的四种菌落分布图中，不可能是用涂布分离法得到的是________。
(2)图中用该方法得到的菌落分布图中，最符合计数要求的是图中的________。 (3)用该方法统计样本菌落数时是否需要设置对照组？__________。为什么？________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。 (4)分别取0.1 mL、已稀释103倍的水样分别涂布到3个琼脂固体培养基的表面进行培养，培养基记录到大肠杆菌的菌落平均数为50。则每升原水样中大肠杆菌数为________。
解析：(1)据图可知，D图所示的菌落分布为划线分离法接种获得的。
(2)利用涂布分离法进行微生物计数时，需要得到30～300个菌落的平板进行计数。 (3)为了增强实验的说服力，通常要设置对照实验，本实验可设置空白对照排除培养基污染产生的影响。
(4)根据公式计算每升原水样中大肠杆菌数为50×103÷0.1×1 000＝5.0×108。 答案：(1)D (2)C
(3)需要 培养基制备不合格会导致菌落数增加 (4)5.0×108
8．(2020·浙江教育绿色评价联盟高三考试)已知某细菌的两种突变类型细菌Ⅰ和细菌Ⅱ的营养条件和菌落特征都相同，但细菌Ⅰ能分解有机物A而不能分解有机物B，细菌Ⅱ能分解有机物B而不能分解有机物A。现有这两种类型细菌的混合液样品，要将其分离，有人设计了一种方案，部分操作步骤如下图。请回答下列问题：
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