③温度：适宜温度：哺乳动物多是36.5℃＋0.5℃；pH：7.2～7.4。
④气体环境：95%空气＋5%CO2。O2是细胞代谢所必需的，CO2的主要作用是维持培养液的pH。
（5）动物细胞培养技术的应用：制备病毒疫苗、制备单克隆抗体、检测有毒物质、培养医学研究的各种细胞。 2.动物体细胞核移植技术和克隆动物
（1）哺乳动物核移植可以分为胚胎细胞核移植（比较容易）和体细胞核移植（比较难）。
（2）选用去核卵(母)细胞的原因：卵(母)细胞比较大，容易操作；含有促使体细胞细胞核表现全能性的物质和营养。 （3）体细胞核移植的大致过程是：（右图）
核移植
胚胎移植
（4）体细胞核移植技术的应用：
①加速家畜遗传改良进程，促进良畜群繁育； ②保护濒危物种，增大存活数量； ③生产珍贵的医用蛋白； ④作为异种移植的供体； ⑤用于组织器官的移植等。
（5）体细胞核移植技术存在的问题：
克隆动物存在着健康问题、表现出遗传和生理缺陷等。 3.动物细胞融合
（1）动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为杂交细胞。
（2）动物细胞融合与植物原生质体融合的原理基本相同，诱导动物细胞融合的方法与植物原生质体融合的方法类似，常用的诱导因素有聚乙二醇、灭活的病毒、电刺激等。 （3）动物细胞融合的意义：克服了远缘杂交的不亲和性，成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物生物新品种培育的重要手段。 4.单克隆抗体
（1）抗体：一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。从血清中分离出的抗体产量低、纯度低、特异性差。
（2）单克隆抗体的制备过程：两次筛选:第一次筛选出杂交瘤细胞，第二次筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞。 （3）杂交瘤细胞的特点：既能大量繁殖，又能产生专一的抗体。 （4）单克隆抗体的优点：特异性强，灵敏度高，并能大量制备。
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（5）在腹腔内增殖的优点：不需要特定的培养基，不需要严格的外界条件。
（6）筛选的时候用：特定的选择性培养基进行筛选。经选择性培养的杂交瘤细胞，还需进行克隆化培养和抗体检测，经多次筛选，就可获得足够数量的能分泌所需抗体的 细胞。 抗原注入小鼠体内
分离
B淋巴细胞 骨髓瘤细胞
细胞融合
杂交瘤细胞
细胞培养
选择培养细胞 小鼠内 培养基
体内培养 体外培养
从腹水提取 从培养液提取
单克隆抗体
（5）单克隆抗体的作用：
① 作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质的细微差异，并跟一定抗原发生特异性结合，具有准确、高效、简易、快速的优点。
② 用于治疗疾病和运载药物：主要用于治疗癌症治疗，可制成“生物导弹”（借助单克隆抗体的导向作用），也有少量用于治疗其它疾病。
专题3 胚胎工程 〖3.1 体内受精和早期胚胎发育〗 胚胎工程的建立
场所：睾丸的曲细精管
时间：从初情期开始，到生殖机能衰退
精子的发生 1）精原细胞→多个初级精母细胞（通过数次有丝分裂）
过程 2）1个初级精母细胞→2个次级精母细胞→4个精子细胞（通过减数分裂，即MI和MII）
3）精子细胞→精子（通过变形：其中细胞核变为精子头的主要部分，高尔基体发育为头部的顶体，中心体演变为精子的尾 ，线粒体聚集在尾的基部形成线粒体鞘。同时细胞内的其他物质浓缩为球状，叫做原生质滴，随精子的成熟过程向后移动，直到最后脱落。）
场所：卵巢
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时间：从胎儿时期开始（胎儿时期完成了卵泡的形成和在卵巢内的储备，这是精子和卵子在发生上的重要区别） 卵子的发生 1）卵原细胞→初级卵母细胞
过程 2）1个初级卵母细胞→1个次级卵母细胞＋第一极体（排卵前后完成）
3）1个次级卵母细胞→1个卵子＋第二极体（精子和卵子结合过程中完成 当在卵细胞膜和透明带的间隙可以观察到两个极体时，说明卵子已经完成
了受精，这是判断卵子是否受精的重要标志）
概念：精子和卵子结合成合子（受精卵）的过程。 受精 场所：雌性的输卵管内
1）受精前的准备阶段1：精子获能
过程 2）受惊前的准备阶段2：卵子的准备（到减数第二次分裂中期，具备与精子受精的能力）
a.精子穿越放射冠和透明带：顶体反应（顶体释放顶体酶可直接溶解卵丘细胞之间的物质，形成精子穿越放射冠的通路），透明带反应（在
精子触及卵细胞膜的瞬间，会产生阻止后来的精子进入透明带的生理反应，这是防止多精入卵受精的第一道屏障）
3）受精阶段 b.进入卵黄膜：卵细胞膜反应（这是防止多精入卵受精的第二道屏障）
c.原核形成和配子结合
卵裂期：细胞在透明带中进行有丝分裂，细胞数量不断增加，但胚胎的总体体积并不增加，或略有减小。 早期胚胎发育 桑椹胚：胚胎细胞达32个左右，每一个细胞都是全能细胞
囊胚：有囊胚腔，出现孵化过程。内细胞团，将来发育成胎儿的各种组织。滋养层将发育成胎膜和胎盘。 原肠胚：内细胞团细胞形成外胚层和内胚层，滋养层发育成胎膜和胎盘，内胚层包围着原肠腔
〖3.2 体外受精和早期胚胎培养〗
试管动物技术：通过人工操作使卵子和精子在体外条件下成熟和受精，并通过培养发育为早期胚胎（桑葚胚或囊胚）后，
再经移植产生后代的技术。
方法一：用促性腺激素处理，使其超数排卵，从中输卵管冲取精子（针对
卵母细胞的采集 实验动物，家畜猪、羊等）
方法二：从屠宰母畜卵巢中采集
方法三：借助超声波探测仪、内窥镜、腹腔镜等工具直接从活体母畜
卵巢中吸取（针对大家畜或大型动物，如牛） 体外受精 卵母细胞的培养：在体外人工培养成熟（减数第二次分裂中期） 精子的采集：方法有假阴道法、手握法和电刺激法等
精子的获能：方法有培养法（通过获能培养液）、化学诱导法（通过肝素或钙离子载体A23187）
获能溶液或专用的受精溶液
受精：获能的精子 ＋培养成熟的卵子 完成受精
胚胎早期培养 条件：受精卵在发育培养液中培养
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培养液成分：无机盐、有机盐、维生素、激素、氨基酸、核苷酸、血清等（两盐，两素，两酸，水 血清）
当胚胎发育到适宜的阶段时，可将其取出向受体移植，或冷冻保存。不同动物胚胎移植的时间不同，牛羊一般要培养到桑椹胚阶段或囊胚阶段才进行移植，人的体外受精胚胎，即试管胚胎，可在8到16个细胞阶段移植 〖3.3 胚胎工程的应用及前景〗
概念：是指将雌性动物体内的早期胚胎，或者通过体外受精及其他方式得到的胚胎(核移植技术和转基因动物），移植到同种的、生理状态相同的其他雌性动物
的体内，使之继续发育为新个体的技术。其中提供胚胎的个体叫供体 （遗传特性和生产性能优秀），接受胚胎的个体叫受体（有健康的体质和正常繁殖能力）。 应用：胚胎移植是转基因、核移植、或体外受精等技术的最后一道“工序” 现状：在牛的胚胎移植中，技术方法更为简便、实用。
意义：可充分发挥雌性优良个体繁殖潜力。供体主要职能只是产生优良特性的胚胎，缩短繁殖周期 实质：见课本
胚胎移植成功与否关系到：供体和受体的生理状况
胚胎移植 1）供、受体生殖器官的生理变化相同，为胚胎提供相同的生理环境
生理学基础 2）早期胚胎没有与母体子宫建立组织联系，为胚胎收集提供可能
3）受体对外来胚胎基本不发生免疫排斥反应，为胚胎的存活提供可能
4）胚胎能与受体子宫建立正常的生理和组织联系，但其遗传物质在孕育过程中不受影响 1）供、受体的选择(选择的条件，见课本)和处理（使用激素进行同期发情处理、（促性腺激素）超数排卵处理）
2）配种或人工受精
基本程序 3）胚胎收集（冲卵（早期胚胎））、检查（胚胎发育到桑椹胚或囊胚）、培养或保存（－196℃的液氮）
4）胚胎移植：手术法（引出子宫和卵巢将其注入）；非手术法（用移植管将其送入子宫） 5）移植后的检查（是否妊娠）等
概念：指采用机械方法将早期胚胎切割成2、4或8等份等，经移植获得同卵双胎或多胎的技术。 仪器设备：实体显微镜和显微操作仪
意义：来自同一胚胎的后代具有相同的遗传物质，属于无性繁殖。
操作程序 1）选择发育良好、形态正常的桑椹胚或囊胚，移入盛有操作液的培养皿
胚胎分割 2）用分割针或分割刀切开胚胎，吸出半个，注入空透明带或直接将裸半胚移植给受体。分割囊胚时要 将内细胞团均等分割，否则会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育。此时还可用分割针分割滋养层，
做胚胎DNA分析性别鉴定。
局限：刚出生的动物体重偏低，毛色和斑纹上存在差异，同卵多胎的可能性有限。 概念：由早期胚胎或原始性腺中分离出来的一类细胞。简称ES或EK细胞。 特点 形态上：体积小、细胞核大、核仁明显
功能上：具有发育的全能性，即可分化为成年动物体任何一种组织细胞；在体外可增殖而不发生分化；可冷冻保存；可进行遗传改造
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