2019年
【加固训练】
人乳头状瘤病毒(HPV)与宫颈癌的发生密切相关，抗HPV的单克隆抗体可以准确检测出HPV，从而及时监控宫颈癌的发生，以下是以HPV衣壳蛋白为抗原制备出单克隆抗体的过程，请据图回答：
(1)将特定的抗原注入小鼠，目的是_______________________________。 (2)不能通过直接培养产生特异性抗体的效应B细胞来获得大量抗体，原因是_________________________________________________________________。 (3)对于抗体检测呈________性的杂交克隆应尽早进行克隆化，克隆化的方法最常用的是有限稀释法，即稀释细胞到3～10个/mL，每孔加入细胞稀释液_____(填“0.1”“1”或“10”)mL，使每个孔内不多于1个细胞，达到单克隆培养的目的。 (4)由上述过程生产出的单克隆抗体不能直接用于人体，理由是_____________。 (5)科学家从某些无限增殖细胞的细胞质中分离出了无限增殖调控基因(prG)，该基因能激发动物细胞分裂，这为单克隆抗体的制备提供了更多的思路。除本题描述的一种制备单克隆抗体技术外，请再简要写出一种制备单克隆抗体的思路：______________________________________________________________。
【解析】(1)将特定的抗原注入小鼠，目的是刺激小鼠产生能产生特定抗体的效应B细胞。
(2)效应B细胞高度分化，直接进行培养时不会通过分裂产生大量效应B细胞。 (3)抗体检验呈阳性，说明该杂交瘤细胞可产生所需抗体；为保证每个小孔不多于1个细胞，根据浓度可推断加入细胞稀释液的量：设加入细胞稀释液的最大量是X，则10个/mL×X=1个，X=0.1 mL。
(4)小鼠的抗体与人的抗体不同，故在人体内可引起免疫排斥反应，所以题图所示过程生产出的单克隆抗体不能直接用于人体。
2019年
(5)根据所给信息可知，还可通过转基因技术或核移植技术获得既能大量增殖、又能产生特定抗体的杂交细胞。
答案：(1)刺激小鼠产生能分泌特定抗体的效应B细胞
(2)效应B细胞高度分化，直接进行培养时不会通过连续分裂产生大量效应B细胞 (3)阳 0.1 (4)小鼠形成的抗体对人体来说是抗原，存在免疫排斥反应
(5)通过基因工程向浆细胞中导入prG；利用核移植技术将浆细胞的细胞核移植到去核的无限增殖细胞中(答对其一即可)
4.(12分)某研究小组进行药物实验时，以动物肝细胞为材料，测定药物对体外培养细胞的毒性。供培养的细胞有甲、乙两种，甲细胞为正常肝细胞，乙细胞为肝肿瘤细胞。请回答下列有关动物细胞培养的问题：
(1)将数量相等的甲细胞和乙细胞分别置于培养瓶中培养，培养液及其他培养条件均相同。一段时间后，观察到甲细胞数量比乙细胞数量______________。
(2)在两种细胞培养过程中，当甲细胞贴满瓶壁时，会出现__________现象，若甲细胞传代培养10～50代左右，发现增殖逐渐缓慢，以至于完全停止，这时部分细胞的________可能会发生变化。药物实验需要大量细胞，两种细胞频繁传代，甲细胞与乙细胞相比，可以传代的次数更多的是________细胞。若用动物的肝脏组织块制备肝细胞悬液，需用________处理。
(3)理论上，乙细胞可与某种B淋巴细胞融合成________细胞，从而制备________，使患者获得特异性免疫。
【解析】(1)由题干分析可知，将数量相等的甲细胞和乙细胞分别置于培养瓶中培养，培养液及其他培养条件均相同。一段时间后，观察到甲细胞数量比乙细胞数量少，因为甲细胞会出现接触抑制现象。
2019年
(2)在两种细胞培养过程中，当甲细胞贴满瓶壁时，会出现接触抑制现象，若甲细胞传代培养10～50代左右，发现增殖逐渐缓慢，以至于完全停止，这时部分细胞的遗传物质(核型)可能会发生变化。甲细胞与乙细胞相比，可以传代的次数更多的是乙细胞。若用动物的肝脏组织块制备肝细胞悬液，需用胰蛋白酶(或胶原蛋白酶)处理。 (3)理论上，乙细胞可与某种B淋巴细胞融合成杂交瘤细胞，从而制备单克隆抗体，使患者获得特异性免疫。 答案：(1)少
(2)接触抑制 遗传物质(核型) 乙 胰蛋白酶(或胶原蛋白酶) (3)杂交瘤 单克隆抗体
5.(12分)(2018·衡水联考)埃博拉病毒(EBOV)是一种能引起人类和灵长类动物发生埃博拉出血热(EBHF)的烈性病毒，利用相应的生物学技术制备出抗EBOV的单克隆抗体，可快速检测EBOV。请回答下列问题：
(1)方法一：给小鼠注射纯化的EBOV蛋白，一段时间后，从小鼠的________中获取浆细胞，将获得的浆细胞与小鼠的________细胞融合，再经过至少________次筛选、检测，最终可获得所需的杂交瘤细胞。
(2)方法二：科学家从细胞中分离出无限增殖基因(prG)，可将prG基因导入能产生抗EBOV抗体的小鼠浆细胞中，导入prG基因的浆细胞具有_______________ ____________________________________________________________的特点。
(3)以上两种方法获得的杂交瘤细胞或带有prG基因的浆细胞，可在________的环境、含有所需营养、具有适宜的________和一定的气体环境等条件下进行体外培养，以便源源不断地产生抗EBOV的单克隆抗体。
2019年
(4)方法二中，若用PCR扩增方法获取目的基因，则需要用到________酶，该方法能够成功获取目的基因的前提是_____________________，以便合成引物。
【解析】(1)给小鼠注射抗原一段时间后，可从小鼠的脾脏中获得浆细胞，浆细胞和小鼠骨髓瘤细胞融合，第一次筛选出杂交瘤细胞，第二次筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞。
(2)将能无限增殖的prG基因导入浆细胞，由于prG基因具有调控细胞无限增殖的功能，因此得到的浆细胞既能无限增殖，又能产生特异性抗体。
(3)以上两种方法获得的杂交瘤细胞或带有prG基因的浆细胞，可在无菌、无毒、含有所需营养、具有适宜的温度和pH、一定的气体环境等条件下进行体外培养，以便源源不断地产生抗EBOV的单克隆抗体。
(4)体外扩增prG基因可采用PCR技术，其中需要热稳定DNA聚合酶(Taq酶)。该方法能够成功获取目的基因的前提是已知目的基因的一段序列，以便合成引物。 答案：(1)脾脏 骨髓瘤 两
(2)既能无限增殖，又能产生抗EBOV的(特异性或专一性或所需的)抗体 (3)无菌、无毒 温度和pH
(4)耐高温的DNA聚合(或Taq) 要有一段已知目的基因的核苷酸序列 【易错提醒】血清抗体与单克隆抗体的辨析
名称 血清 由浆细胞分泌 抗体 单克隆 抗体 由杂交瘤 特异性强，灵敏度高，能大量制备 细胞分泌 低、特异性差 产生 特点 一般从血清中分离，产量低、纯度6.(12分)已知某传染性疾病的病原体为RNA病毒，该病毒表面的A蛋白为主要抗原，该疫苗生产和抗体制备的部分流程如图。
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