植物染色体标本的制备和观察(2)

材料为大蒜,主要是多倍体染色体标本制备

5.3 固定 将经过预处理或没有预处理的材料，放到卡诺氏固定液中固定 （固定液的量约为材料的10倍，要求一个容器中所装的材料不能太多，温度不能太高）。固定2～24h后分别在95％ 和85％乙醇中各30min ，再转入70%酒精中，于4℃冰箱内保存，保存时间最好不超过二个月。

5.4 去壁解离 取固定好的各种植物根尖，倒去固定液，用蒸馏水漂洗2～3次，放入1N HCl溶液中60℃水解8～12min，再用蒸馏水洗净。适度的水解分离使材料呈白色微透明，状似豆腐，以解剖针能轻轻压碎为好。

5.5 后低渗 用吸管小心吸去解离液，用蒸馏水慢慢冲洗3～5次，最后停留在蒸馏水中浸泡20~30min左右。

5.6 染色 将根尖放在载玻片中央，用刀片将根冠和伸长区切除，只留乳白色的分生区，用镊子或解剖针将材料轻轻捣碎。滴上一滴改良苯酚品红染液，染色8～15min后，盖上盖玻片。

5.7 压片 在盖玻片上面铺上吸水纸，固定好盖玻片，用拇指垂直压片，然后用铅笔的橡皮头轻轻均匀地同一个方向敲打盖片，至肉眼见材料呈雾状即可。敲打时，铅笔应垂直于玻片，勿使盖片移动。

5.8 镜检观察 先在低倍镜下观察染色和细胞分散的情况，后用油镜（滴加香柏油）找到染色体轮廓清晰、染色适中、分散而不重叠的分裂中期。仔细观察染色形态和计数，对典型分裂相细胞进行显微摄影。

对照组：不经过秋水仙素进行预处理这一步，其他的步骤相同。观察大蒜根尖细胞的染色体。

结果

经过秋水仙素处理的大蒜染色体比较的粗，而且分散的比较开，大概能数清有16条左右（如图1所示）；没有经过秋水仙素预处理的细胞，大都比较的细长，且染色体都比较的集中，数起来比较的困难（如图2所示）。

材料为大蒜,主要是多倍体染色体标本制备

1.分析

因为着丝点在分裂后期会自动分裂，两个染色单体分为两个染色体。纺锤丝的作用是将分裂的染色体拉向细胞两极，然后细胞中间自动形成细胞板，最后变成两个细胞。 使用秋水仙素后，纺锤丝的合成被抑制，在后期染色单体分裂后，没有纺锤丝，不能被拉向细胞两极，使有丝分裂细胞停留于中期，最终导致染色体加倍或染色体非整倍体变异。在这个实验中，秋水仙素作为染色体预处理剂，主要是为了积累较多的中期细胞，并使染色体高度浓缩变短以利分散。所以，我们可以看到用秋水仙素预处理的组别的染色体都是比较粗的，并且那些细胞都是处于中期或中期以前。而没有用秋水仙素进行预处理的组别，染色体都比较细长。

材料为大蒜,主要是多倍体染色体标本制备

同时，染色体缩短变粗有利于观察和数数。 2.讨论

2.1预处理的目的是：通过抑制和破坏纺锤丝的形成来获得更多的中期分裂相；同时还可改变细胞质的粘度，促使染色体缩短和分散，便于压片和观察。 2.2固定的目的是：

2.2.1迅速防止细胞死亡后的变化，如自溶、腐败等，尽量保持生长状态结构。 2.2.2使细胞中的蛋白质、脂肪等成分转变为不溶性物质，以保持生前的形态； 2.2.3使组织内各种物质成分产生不同的折光率，便于观察和鉴定； 2.2.4使不同组织成分对燃料有不同的亲和力。便于染色； 2.2.5防止细胞过度收缩或膨胀，失去原有的形态结构。

2.3解离的目的是：由于植物细胞的细胞壁对细胞形态和结构起支撑和保护作用，分生组织的细胞壁结构将分生细胞结合成一个整体，因此在压片之前需要采用适当方法软化或部分分解细胞壁，使细胞间易于分离。同时，解离也可适当清除部分细胞质，使细胞质背景趋于透明化，便于观察染色。

2.4后低渗的作用是使细胞吸收水分而膨胀，达到细胞壁破裂的目的，进而使细胞中已分散的染色体更加分散，便于数染色体，这是一个关键步骤。但是，如果后低渗时间过长，会使细胞吸水过多而导致细胞胀破，使多个细胞的染色体混合在一起，影响我们对染色体的计数。 2.5制备植物细胞的染色体标本，在取材上必须选择细胞分裂比较旺盛，而且取材较为方便的组织作为实验材料，其原因主要是：高等植物有丝分裂主要发生在根尖、茎尖生长点及幼叶等器官的分生组织（分生区），其中根尖是常用材料，因为根尖取材容易，操作和鉴定也比其它器官与组织方便，同时可以根据植物生长情况，选取合适的植物进行发根，因而可以获得大量实验素材，有利于实验。

参考文献：

[1] 陈瑞阳， 宋文芹，李秀兰，等.植物染色体标本制备的去壁、低渗法及其在细胞遗传学中的意义[J].遗传学报， 1982年02期

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