5株抗常见动物病原菌的优良拮抗放线菌的分类鉴定(4)

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648中国预防兽医学报2009年

为烬灰类群。2.2

生理生化指标

参照文献[6，7]中规定的相关

测定项目，对供试的5株菌进行了10种共38项生理生化特征鉴定，结果见表2。

表2供试菌的生理生化特性

Table2Physiologicalandbiochemical

characteristicsoftestedstrains

指标ActinomyceteIndex120202-F-1766J03

明胶液化Gelatinhydrolysis+++++-淀粉水解Starchhydrolysis-2.6-硝酸盐还原Nitricacidreduction+++卵磷脂酶Lecithinhydrolysi---硫化氢产生ProducingH2S++-+黑色素产生Tyrosinedrolysis++纤维素分解Utilizationofcellulose---+-+产酸Acidproduction

---石蕊牛奶试验产碱Alkaliproduction

+--Litmusmilktest胨化Peptonizatio

---凝固Coagulatio

---还原Reduction

+++尿素Urea

+++硝酸钾KNO3

---亚硝酸钠NaNO2

+++酪氨酸Tyrosine

+++丝氨酸Serine

++唯一N利用烟酰胺Nicotinamide+++Nitrogensource.甘氨酸Glycine++++甲硫氨酸Methionine

+++丙氨酸Alanine

+++谷氨酸Glutamate

+++腺嘌呤Adenine

+++阳对照PositiveCK

+++阴对照NegativeCK

+++D-葡萄糖Glucose

+++D-木糖Xylose

+++L-鼠李糖Rhamnose

+++D-果糖Fructose

+++蔗糖Sucrose

+++乳糖Lactose

+麦芽糖Maltose+++唯一C源利用甘露糖Mannose++

Carbonsource甘油Glycerol---+++山梨醇Sorbitol

++-醋酸钠Sodiumacetate

++-柠檬酸钠Sodiumcitrate

---草酸钠Sodiumoxalate

-++马尿酸钠Hippurate

++丁二酸钠Sodiumsuccinate++++阳对照PositiveCK

+++阴对照NegativeCK

strains

35013010++++++++2.12.7+++--+-+--+---------++++--++++++++-+++++++++-+++++++++++++++++--++++++--++++++++

toN2;Milkpeptonization:+peptonized＜1/3,++peptonized1/3-2/3,

+++peptonized＞2/3;CarbonandNitrogensource:+canbeusedorgrow,-cannotbeusedorgrow

表2结果显示，供试菌株的生理生化特征差异不大，尤其是硝酸盐还原、碳氮源利用能力等，若要进一步确定其分类地位，需借助分子手段。2.3

细胞壁化学组分分析

5株菌的细胞壁均含LL-DAP和甘氨酸，属胞壁Ⅰ型。全细胞水解液均含葡萄糖和核糖，但无特征性糖，糖型C。细胞壁类型和糖型均表现为典型的链霉菌特征(表3)。

Table3

菌株号StrainNo.120202-F-1766J0335013010

表3细胞壁化学组分分析

Analysisofchemicalcompositionofcellwall

全糖种类氨基酸种类胞壁类型糖型KindsofKindsofTypesofTypessugarAminoAcidCellwallofsugarGlu、Rib、ManGly、Asp、Glu、AlaCⅠ

Glu、RibCGly、Asp、Glu、AlaⅠ

Glu、Rib、ManCGly、Asp、Glu、AlaⅠ

Glu、Rib、ManCGly、Asp、Glu、AlaⅠ

Glu、RibCGly、Asp、Glu、AlaⅠ

DAP类型

TypesofDAPLL-DAPLL-DAPLL-DAPLL-DAPLL-DAP

注：Gly甘氨酸；Asp天门冬酰氨；Glu谷氨酸；Ala丙氨酸；Glu葡萄糖；Rib：核糖；Man甘露糖

2.416SrDNA序列分析将供试菌株的16SrDNA

序列与GenBank和EMBL数据库中链霉菌属相关的菌株进行16SrDNA序列比较，并以Nocardiopsis

aegyptica为外群，构建系统发育树(图1)。

注：明胶液化：-为不液化，+为液化＜1/3，++为液化1/3～1/2，+++为液化1/2～2/3，++++为液化＞2/3；硝酸盐还原：-为不还源，+为还原成NO2，++为还原成N2；牛奶胨化：+为胨化＜1/3，++为胨化在1/3～2/3，+++为胨化＞2/3；碳氮源利用：+能够利用或生长，-不能够利用或生长

Note:Gelatinliquefaction:-non-liquefaction,+liquefied＜1/3,++liquefied1/3-1/2,+++liquefied1/2-2/3,++++:liquefied＞2/3;Nitratereduction:-non-reduction,+bereductedtoNO2,++bereducted

在系统发育树上，菌株1202与Streptomyces

xantholiticus，Streptomycesgobitricini，Streptomycesnatalensis4株菌构成1个分支，1202与这3株菌的

序列同源性分别为95.45%，99.29%，95.15%，其中与Streptomycesgobitricini序列同源性最高。02-F-17与Streptomycesbikiniensis，Streptomycescaviscabies，

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