中国糖化血红蛋白测定专家共识2014 (2)

在糖尿病患者的长期血糖监测治疗中，如患者更换就诊医院或临床实验室，可能会导致 HbA1c的检测方法改变。使用不同厂商、不同方法、不同试剂检测同一患者的 HbA1c水平时，其结果可能出现差异，但不能相差太大，可接受的差异应控制在 ±0.5%HbA1c范围内。原因是由于目前 HbA1c测定在国际上已经实现了标准化，采用不同厂商、不同方法、不同试剂测定同 1份样本的结果应该是可比的。 （五） HbA1c测定参考系统——

IFCC也对 HbA1c标准化工作有重要作用，建立了特异测定 HbA1c的参考方法，使得全球 HbA1c测定结果从无溯源性到有溯源性。 1. 参考方法：

国际公认测定 HbA1c的参考方法为 IFCC推荐的 HPLC串联电喷雾电离一级质谱或 HPLC串联毛细管电泳，两种方法结果一致。测定方法主要分为三步：首先制备溶血液；然后采用蛋白内切酶 Glu-C将溶血液酶解消化，得到糖基化和非糖基化的 β链 N末端六肽（ HbA1c六肽、 HbA0六肽）；最后采用 HPLC串联电喷雾电离一级质谱或 HPLC串联毛细管电泳对 HbA1c六肽和 HbA0六肽进行定量分析。以标准物质 IRMM/IFCC-466 HbA1c和 IRMM/IFCC-467 HbA0的混合物作为校准品，同步进行酶解、分析，得到标准曲线，根据 HbA1c六肽、 HbA0六肽的峰面积比计算得出 HbA1c的量。

2. HbA1c测定指定比对方法（ designated comparison method，DCM）：

美国 HbA1c标准化计划使用离子交换 HPLC为“参考方法”，目前为 HbA1c测定的指定比对方法，方法原理主要基于 HbA1c与其他组分所带的电荷不同，分别洗脱检出，由于受技术条件的限制，不能特异测定 HbA1c，有其他组分被当做 HbA1c同时检出，因此，测定结果高于 IFCC结果。 IFCC参考实验室及 NGSP参考实验室经过几年的比对，得出结论： NGSP测定结果与 IFCC测定结果之间存在非常确定的相关性，可用回归方程表示为： NGSP-HbA1c =0.0915×（IFCC-HbA1c）+2.15%（r2=0.998），因此，现行的 NGSP结果可以溯源到 IFCC参考系统，即可以溯源到溯源链的最高等级国际单位（ SI单位）制。

另外还有 2个 HbA1c测定的指定比对方法，一个为日本的 KO500方法，另一个为瑞典的 Mono S方法。三个指定比对方法测定结果与 IFCC测定结果之间存在非常确定的相关性，皆可用回归方程表示，方法特异性从高到低的顺序依次为： IFCC方法、瑞典方法、日本方法、美国方法，因此，测定结果从高到低的顺序依次为：美国结果、日本结果、瑞典结果、 IFCC结果，如：美国 NGSP的7%HbA1c相当于 IFCC的53mmol/mol，日本的6.6%HbA1c，

梁怀昌—2014糖化血红蛋白测定专家共识 | 6 瑞典的6.1%HbA1c，不难看出，在指定比对方法中瑞典方法特异性最好。 3.标准物质：

HbA1c有国际基准标准物质（ primaryreference material），为人血基质的 IRMM/IFCC-466 HbA1c（认证值：934 mmol/mol，不确定度：22 mmol/mol）及 IRMM/IFCC-467 HbA0（认证值 >976 mmol/mol），由比利时的标准物质及测量研究所研制，二个标准物质以一定的比例混合为 HbA1c测定的参考方法校准。

4. IFCC参考系统在 HbA1c标准化中的地位及应用：

IFCC参考系统是 HbA1c测定标准化唯一有效的参考系统。厂商出厂方法应提供可溯源到 IFCC参考方法的相关证明。 5.参考系统的应用方式及范围：

参考系统的应用方式包括应用参考物质或参考方法，主要有：（1）分析系统的溯源和量值传递；（2）试剂的制备及质量评价；（3）校准物的制备、定值及质量评价；（4）新常规方法的发展及评价；（5）室间质量评价计划中的靶值确定；（6）协作研究中分析的质量保证。 三、方法的使用

（一）分析系统分类及验证—— 临床检验中的分析系统可分为 3类。

1.封闭系统：仪器、试剂和校准物来自于同一厂商。 2.开放系统：试剂和校准物来自同一厂商，仪器另选。

3.组合系统：仪器、试剂和校准物分别来自不同厂商，由实验室自己组合。

实验室在准备使用一个新的分析系统（或新仪器、新试剂）测定临床样本前，应对系统性能进行验证，本共识中的验证主要是指新的分析系统在本实验室的性能是否与规定性能指标或厂商提供的性能指标一致。

梁怀昌—2014糖化血红蛋白测定专家共识 | 7 （二）准确度、精密度实验方法—— 1.准确度验证方法，包括但不限于以下方式：

（1）参加室间质量评价（能力验证）活动；（2）采用适当的有证标准物质（ certified reference material，CRM）；（3）与运行经过认证分析系统的有资质实验室的测定结果进行比对。值得注意的是，只有无法得到验证实验方法的其他替代材料或过程时，才能使用厂商产品校准物或准确度控制物。 2.精密度实验方法：

分别采用不少于 2个水平的质控物（高、低值）或患者样品（尽量在医学决定水平），每天测定 2次（ 2次时间间隔不少于2h），每次重复测 2个结果，测定 20个工作日，以 20个工作日的 80个结果计算平均值、标准差及变异系数。此实验方法主要是针对未经认证的封闭系统、开放系统以及厂商给出的性能指标不符合本共识要求的分析系统。临床检验中，精密度常用不精密度表达，不精密度由变异系数评估，变异系数越小，精密度越好，反之，变异系数越大，精密度越差。

精密度是决定准确度的先决条件，准确度建立在精密度基础上。因此，精密度实验应慎重，采用的时间长度很重要，只有在相对较长的时间内，一些因素 [如：不同批号试剂、校准物、色谱柱（适用时）、不同校准频率、不同操作人员、不同分析仪状况、不同环境条件等 ]对测定结果的影响才能体现，才可以客观反映实际情况，而实验结果的有效性及可靠性也随时间的延长而增加。

（三）校准物和质控物可使用冻干或冰冻校准物，校准物复溶或融化后应平衡至室温并充分混匀后再使用，不可反复冻融。

可选用冻干或冰冻全血质控物，质控物复溶或融化后应平衡至室温并充分混匀后再进行测定，不可反复冻融。自制新鲜冰冻全血质控物是 HbA1c测定的良好质控物，如自制质控物应认真选择原料和工艺，原料应为足够量的混合新鲜全血，采用冻存管分装，并对均匀性进行考察评价，评价所用仪器应具有良好的精密度，储存于 -70℃或更低温度，可以稳定 1年以上。

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（四）色谱（层析）柱对于使用色谱柱的方法，不同方法的色谱柱可检测样品数量不同。 （五）样本采集、处理和储存——

HbA1c存在于人体红细胞的整个寿命过程中，红细胞的寿命一般为 120 d左右，在红细胞凋亡前，血液中 HbA1c含量也会保持相对恒定。因此， HbA1c水平反映的是在检测前 120 d内的平均血糖水平，而与抽血时间、患者是否空腹、是否使用胰岛素等因素无关。样本采集应按照适用于临床实验室检测的常规方法采集静脉血，也可采指末端毛细血管血。一般采用含有乙二胺四乙酸（ EDTA）盐抗凝剂的采血管，或根据厂家要求使用采血管。 实验室有责任按照厂商方法的要求给临床提供清晰、准确的样本采集指导。应有样本采集、类型、运送、接收（拒收）和储存的具体要求并记录，任何对样本的不当处理，如置于高温环境，可引入大量未知干扰，干扰程度取决于所用方法 。

（六）测定—— 1.安全措施：

血液样本及来源于血液的校准物、质控物有可能含有致病微生物，应避免入口或与皮肤接触，在使用后应按国家规定的具有危害性的生物品处理。 2.测定程序：

梁怀昌—2014糖化血红蛋白测定专家共识 | 9 实验室应制定合理的操作规范（标准操作程序），内容至少包括：项目名称、方法学原理、样本（采血管/抗凝剂、储存）、校准程序（校准日期间隔、校准方、校准方法）、室内质量控制程序、样本的测定程序、干扰因素、参考区间（参考范围）、试剂、色谱柱（可测定样品数量，适用于使用色谱柱的方法）、维护程序等。

（七）结果报告—— 1.单位：

目前，关于 HbA1c的结果报告在国际上已经达成共识，应以 IFCC的国际单位制（mmol/mol）以及衍生的 NGSP传统单位（% HbA1c）共同报告。NGSP单位与 IFCC单位换算的回归方程为：HbA1c（NGSP）=0.0915×HbA1c（IFCC）+2.15%（适用范围为： 4% HbA1c～12% HbA1c）。 2.参考区间：

HbA1c源于DCCT/UKPDS的参考区间为4%HbA1c～6% HbA1c（20～42 mmol/mol），实验室应对此参考区间进行验证，如不适用，应建立适用于自己实验室的参考范围，并在报告中注明。

实验室应尽量避免更换 HbA1c的测定方法，如需改变，应告知临床医师。 （八）异常结果的处理——

在 HbA1c的结果解释及报告过程中，应提倡实验室与临床之间的积极沟通。以综合考量、分析对测定结果可能的干扰，为临床糖尿病诊疗提供可靠的依据。

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