PCR实验室SOP文件 (6)

图3

④ 选择hbv后点击

按钮，回到前一个界面；点击

按钮，进入样本设置界面（图4）；

图4

⑤ 在这个界面里，默认所有的孔位都有样品。

4

该图标表示：第35号标本，该图标

表示：标准品4，浓度诶5×10拷贝/毫升。根据当天标本的实际情况把没有放置标本的孔位去除：首先拖动鼠标将没有放置标本的孔位选中（按住Ctrl键的同时用鼠标选择相应孔位），点击Inspector”,进入选择界面（图5）。

“Hide/Show Well

图5

将

选择框中的“√”去掉，变成

，点击

显示的为“（none）”。

回到图4，同时被

选中孔中的会被去掉。在图5 中请确认中

⑥ 输入标准品的方法：请先选择要设置为标准品的孔位点击进入如下界面，将“Task”下选项设

置为“Standard”,在“Quantity”下输入相应标准品的拷贝数，如“50000”(图6)

图6

⑦ 设置好标本及标准品后，点击7）。

中的

进入反应条件设置界面（图

图7

⑧ 一切设定好后，点击

“Save Document”,在跳出的如下界面中输入文件名（一般用项目名+年

回到图7。

月日表示），如“HBV20060526”(图8).然后点击

图8

⑨ 点击

进入实验阶段(图中“Start”因为没有联机呈灰色),此时机器会调用实验所需

的程序，稍后会出现实验所需时间及实验中的温度变化情况。一般等这些数字显示出来就可以放心离开了。

⑩ 实验过程中可以点击图

7

中

进入实时荧光

中的

进入实时荧光PCR扩增曲线的实时显示界面。

⑾ 实验结束后分析实验结果并保存数据，退出软件的主菜单；关掉电脑，关闭ABI-7300仪器正面的电源开关.

c. ABI 7300型荧光定量检测仪实验结果分析

A. 实验结果无效的判断标准：出现下述四种情况中的任何一种或多种，当次实验结果不可发，查找原因，重做实验。

① 阴性对照出现扩增。 ② 阳性对照无扩增。

③ 大批甚至所有的标本都扩增了。

④ 室内质控检测结果出现失控情况，实验失控的具体标准详见室内质控标准操作程序。 B. 实验结果有效的判断标准：达到下列要求后，当次实验有效，可以发放结果。

① 阴性对照没有扩增，阳性对照扩增。

② 荧光扩增仪阳性标准品梯度曲线平滑均匀，斜率、截距和相关系数三个参数的数值均在范围内。 ③ 室内质控检测结果处于在控状态。 5. 本文涉及以下表格

室间质评记录表 PCR室内质控记录表 室内质控图

PCR界面。点击

可以

产物分析区工作制度 标准操作、程序文件

1、目的：保证扩增结果分析的标准化、规范化。

2．适用范围：适用于本室使用的六一仪器的DYY —6C型琼脂糖凝胶电泳仪和美国伯乐BIO-RAD Gel Doc XR 凝胶成像仪。

3．负责人： 操作人： 4．细则： 4.1 配置：

凝胶电泳仪一台，凝胶成像仪一台，电脑一台、可移动紫外灯一台?、高压消毒锅一台？、空调一台、其它耗品、办公用品若干。 4.2 功能：

进行扩增反应产物进行分析。 4.3 内务管理：

a. 着装和标识：本区工作服、专用设备均以？色为标识。

b. 实验人员进入该区须穿本区专用？色工作服。实验中须戴一次性手套（手套需常更换）、鞋套或本区

专用拖鞋。

c. 从传递窗中取出已扩增好的反应管取样电泳并分析结果。

d. 记录温湿度计读数（本区每天在工作前利用本区的温控设备使温度控制在15-25℃之间）；作好仪器

的维护、实验数据的记录。 e. 关闭仪器，记录运行状态。

f. 实验结束后将已经扩增的反应管放入塑料套袋中密闭后带出，脱下手套、鞋套置于专用污物桶中，

由卫生员（经培训）清除。 g. 实验完毕打开紫外灯消毒60分钟

4.4凝胶电泳仪及凝胶成像仪操作规程 a.

凝胶电泳仪操作

① 确认电源符合要求后，开启电泳仪的“电源开关”；

② 仪器蜂鸣4声后显示上一次工作的设定值；因是重复同一参数使用时，即可直接选择Start后启动； ③ 按【启/停】键后，仪器鸣响4声，输出启动，“输出指示灯”闪亮，开始工作（当输出稳定后，稳

压/稳流状态改变时，仪器会自动鸣响2声以示提醒用户）； ④ 定时到后仪器自动显示已用时间并反复鸣响，关机取出凝胶； B. 凝胶成像仪操作、

⑤ 将取出的凝胶置于适当的载物平台上 ⑥ 关闭暗箱门

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