序列文件准备
第一行 序列总数量 最长序列的bp数 第二行 >序列名称 第三行 无空格的序列 第一个序列往往是外群 然后是自己的序列 最后是外源序列
Clustal 2.0应用程序
File→load sequences 选多序列 mode→multiple Alignment mode
Alignment→iteraction→iterate each alignment step
Alignment→output formut options→phylip format(选中)→close→do complete Alignment→align 找出相似bp的头部,把前边的从文本中切掉,后边的类似(n尽量少) File→load sequences
Alignment→output formut options→phylip format(选中)→close→do complete Alignment→align 将生成的.phy文件复制到简单路径中 1、phylip→exe→seqboot(应用程序),输入文件的路径名(.phy) 改参数: Y 回车
101 回车(随机数) 生成“outfile文件”改名为:1 2、prodist(应用程序) 输入1 改参数:P回车
M 回车 选D 100 回车 Y 回车
生成“outfile文件”改名为:2 3、neighbor(应用程序) 输入2 改参数:
M 回车 100 回车
随机数 回车(见文件)
O 回车
输入外群序列位置 回车
Y 回车
生成“outfile文件”改名为:3
“outtree文件”改名为:4 4、consense (应用程序) 输入4 改参数:O 回车
输入外群序列位置 回车
Y 回车
生成“outfile文件”改名为:5
“outtree文件”改名为:6
5、Proml (应用程序)输入开始的.phy文件
改U:直接输入U,回车,应显示NO,use use trees in input file;O改外群。输出的文件名改为7,intree。
1
6、 打开drawgram文件,直接输入font2,输出文件file plot,该文件格式为PDF。(先把后缀名改为PS,再打开为PDF)。
7、 打开的pdf文件用photoshop打开,按文件4中的可信度在每个分枝处标注。同时将文件变得更清楚。
DOTUR
用phylip直接做prodist 改参数P选KIMURA,存为.dist文件,重新命名一个文件夹,把.dist文件放入 开始——》运行——》输入cmd 回车,在DOC提示符下拷入DOTUR路径: 输入cd再输入DOTUR路径。
在dotur>后输入dotur空格再拉入文件(.dist),回车。
dotur>dotur abc.dist 回车
PcoA分析:
准备文件1. PHYLIP最后建树用的数字文件,或者是mega的树建好后重新打开生成的*.newick文件(该文件用file里菜单生成)。
准备文件2.手动编写sample ID mapping 文件,文件格式为*.TXT.
该文件第一列为建树用到的序列名称,即出现在树中的名称;第二列为样品站位或者是归类描述,一般是大类;第三列为序列在站位或者是归类中出现的次数。
将上述两个文件传到fastunifrac 网站上。将获得的文件下载,并根据网站给出的图片用下载的文件在excel中作图。
2
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