花生12脂肪酸脱氢酶基因AhFAD2B在酿酒酵母中的表达及功能分析(8)

6　　　　　　　　　　　　　　　花　生　学　报　　　　　　　　　　　　　　　　　　　35卷

植物细胞内含有两类脂肪酸脱氢酶,分别定位在质体和内质网。内质网定位的脂肪酸脱氢酶以细胞色素b5为电子供体,质体定位的脂肪酸脱氢酶以铁氧还蛋白为电子供体[22]。酵母中含有由细胞色素b5,NADPH和NADPH-细胞色素b5还原酶组成的电子传递系统,适于用来表达内质网脂肪酸脱氢酶,而质体脂肪酸脱氢酶在酵母中的表达效果会大打折扣[22]。AhFAD2B能在酵母中表达并发挥功能,表明其编码的是内质网定位的Δ12脂肪酸脱氢酶。

Δ拟南芥和香菇的Δ12脱氢酶基因在酵母中表达,15℃下C18∶29,12大量积累,而28℃下积累

量却很少[10,23],但是,生长温度越低,酵母的生长速度就越慢,本实验兼顾产物的积累量和酵母的生长速度,采用20℃培养,收到了良好的效果。

,脂肪酸成分简单,,。JungS等表达AhFAD2B以p,[9],INVScI/pYES2是较常用K601为受体菌,p416K601/p416系统,K601/p416系统跟INVScI/pYES2系统相比有很多优点,p416TEF启动子不受葡萄糖影响,可以使用廉价的葡萄糖作为碳源,节省成本。由于TEF启动子是组成型启动子,外源基因的表达受培养条件影响较小,表达量较稳定,方便操作。本实验室曾使用该系统高效表达了一个大豆ω-3脂肪酸脱氢酶基因。本试验的结果也说明K601/p416系统是一个更加优越的脂肪酸脱氢酶酵母表达系统。

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