岛津LC-20AT液相色谱操作步骤

岛津LC-20AT高效液相色谱操作步骤

1、流动相的处理

共有5个流动相储液瓶。一般RP-HPLC中，A（无机相）、B（有机相）为分析流动相；C（水）、D（甲醇）用于柱子后处理清洗；50%甲醇-水用于清洗自动进样针

流动相体积VA、B=100+总流速×比例系数×分析时间（mL）；Vc≥300mL； VD≈350mL；V50%甲醇≈300mL

所有流动相须用0.22um孔径滤膜过滤（根据有机相和无机相选用相应滤膜），清洗储液瓶，不能在清洗过程中留下污迹，并超声30min，超声完成后禁止剧烈摇晃

2、开机

开启插座电源 电脑开机

打开仪器电源（LC—20AT最后打开，等待数秒后“control”指示灯亮） 打开软件（Labsolution 仪器 LC—20A），若连接正常则软件显示 LC就绪

3、自动排气

将各流动相过滤头缓慢放入流动相中

在简单设置界面设置总流速为0.2mL/min；在自动排气界面设置自动排气参数（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ各流动相≥5min，自动进样器≥25min），不勾选“排气结束后运行控制器”

“下载” “执行自动排气”

等待排气结束

4、样品处理

稀释后的样品（浓度约1mg/mL，不宜过高）用注射器经0.22um过滤器注入样品瓶

样品应≥2/3样品瓶体积（1.5mL样品瓶）

按序号依次将样品瓶放入自动进样器的样品架上

切记：将样品架推到底！

5、系统平衡及设置分析条件

自动排气完成后，设置柱温、检测波长等参数 (建议柱温高于环境10℃)，用梯度洗脱初始流动相平衡柱子（流动相比例与梯度洗脱初始比例一致） “下载”/取消激活仪器”，此时系统显示：等待柱温稳定 缓慢增加总流速至样品分析所需流速，Vmax=1ml/min（每隔1分钟增大0.2mL/min，注意每次增大都点击“下载”）

在时间程序界面设置梯度洗脱条件

若要保存方法文件：文件 方法文件另存

等待基线平稳（留意泵压力是否稳定），待系统显示：LC就绪，右击，进行

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