试剂准备区工作制度 标准操作、程序文件
1．目的：规范试剂准备区的配置、功能、内务管理等。 2．适用范围：PCR实验室。 3．负责人： 操作人： 4．细则： 4.1 配置：
普通冰箱？一台，超净工作台一台，台式离心机一台，混匀器一台，加样器一套，可移动紫外灯？一台，空调一台，生物垃圾桶和生活垃圾桶各一个，办公用品若干。 4.2 功能：
储存溶液的准备，反应体系的准备，分装，成品试剂和化学试剂的贮存，75%乙醇，？病毒培养液等简单试剂的配制。 4.3 内务管理：
f. 着装和标识：本区工作服以白色？、专用设备以绿色？为标识。
g. 实验人员进入该区须穿本区专用白色工作服。实验中须戴一次性手套、鞋套或本区专用拖鞋。 h. 记录温湿度计读数和冰箱的温度计读数。（本区每天在工作前利用本区的温控设备使温度控制在
15-25℃之间）
i. 根据当天的标本取出当天实验须配制和使用的试剂，其余试剂要立即收好放回冰箱内。试剂的配制
须在超净工作台内完成。
j. 每次实验均应清点库存试剂，每周检查有无过期或将近到期的试剂，或作报废处理或优先使用，避
免浪费，然后记录试剂的详细保存情况。
k. 实验中使用的离心管、吸头等均为一次性用品，使用时应在消毒有效期内。
l. 试剂准备工作完成后，将使用过的离心管、吸头置于盛有84消毒液的废液缸中，还原实验台面。 m. 将准备好的试剂放入传递窗中。其他区的用品不得带入本区。每次实验记录，书写工整详细，应使
用本室专用的、带本室标识的记录本、纸和笔。
n. 走出试剂准备室，在缓冲区脱下工作服，将手套及鞋套置于专用污物桶中。 o. 工作完毕打开紫外灯消毒30分钟。 5. 本文涉及以下表格 试剂保存使用登记表 耗材使用登记表 实验记录本 反应体系配置说明书
标本制备区工作制度 标准操作、程序文件
1.目的：规范样本处理区的配置、功能、内务管理等。 2.适用范围：PCR实验室。 3．负责人： 操作人： 4．细则： 4.1 配置：
冰箱一台，生物安全柜一台，台式高速冷冻离心机一台，混匀器一台，加样器一套，可移动紫外灯？一台，电热恒温水浴箱？一台，空调一台，其它耗品、办公用品若干。 4.2 功能：
本区负责各种标本、质控样品的核酸提取纯化，储藏，样本贮存。 4.3 内务管理：
a. 着装和标识：本区工作服、专用设备均以蓝色？为标识。
b. 验人员进入该区须穿本区专用蓝色工作服。实验中须戴一次性手套（手套需常更换）、鞋套或本区专
用拖鞋。
c. 从传递窗中取出试剂放入冰箱试剂存放专区暂存。
d. 记录温湿度计读数和冰箱的温度计读数。（本区每天在工作前利用本区的温控设备使温度控制在
15-25℃之间）
e. 核对标本的编号、类型和标本数量。
f. 按试剂盒要求进行标本的裂解和提取处理，在生物安全柜上进行加样，加样后低12000rpm离心数秒。 g. 使用本室专用的经过无菌处理的加样器和带滤芯的吸头。 h. 使用过的离心管、吸头须置于盛有5%施康消毒液的废液缸中。 i. 使用带有本室标识的记录本、纸和笔。其他区的用品不得带入本室。 j. 患者标本应按有生物传染性危险品对待。 k. 标本处理完成后，关闭所有仪器，记录运行状态。
l. 走出标本处理区，在缓冲区脱下专用工作服，将手套、鞋套置于专用污物桶中。 m. 实验完毕打开紫外灯消毒60分钟。
4.4核酸提取操作规程
本实验室使用江苏硕世的核酸提取试剂
取200μl样品于1.5ml离心管中
↓
加入400μl Lysis Buffer,振荡混匀，室温孵育10分钟
↓
加入450μl Binding Buffer (已加无水乙醇)，振荡混匀
↓
将600μl混合液移至一新吸附柱中，4℃12000rpm，离心1分钟；弃废液，将吸附柱放入同一收集管中
↓
将剩余混合液移至吸附柱中，4℃12000rpm，离心1分钟；弃废液，将吸附柱放入新收集管中
↓
加入400μl WB1，4℃12000rpm，离心30秒；弃废液，将吸附柱放入同一收集管中
↓
加入600μl WB2 (已加无水乙醇)，4℃12000rpm，离心30秒；弃废液，将吸附柱放入同一收集管中
↓
4℃12000rpm，空柱离心3分钟
↓
将吸附柱放入新离心管中，在吸附柱膜中央小心加入50μl Elution Buffer,室温静置2-5分钟
↓
4℃12000rpm，离心1分钟
↓ -20℃保存备用
5.本文涉及以下表格 试剂保存使用登记表 核酸提取说明书
扩增区工作制度 标准操作、程序文件
1.目的：规范基因扩增、分析区的配置、功能、内务管理等。 2.适用范围：PCR实验室。 3．负责人： 操作人： 4．细则： 4.1 配置：
美国伯乐PTC-200型核酸扩增仪一台，ABI7300荧光定量检测仪一台，电脑一台、可移动紫外灯一台?、空调一台、其它耗品、办公用品若干。 4.2 功能：
进行扩增反应并对产物进行分析。 4.3 内务管理：
a. 着装和标识：本区工作服、专用设备均以红色为标识。
b. 实验人员进入该区须穿本区专用红色工作服。实验中须戴一次性手套（手套需常更换）、鞋套或本区
专用拖鞋。
c. 从传递窗中取出已加样并离心好的反应管上机扩增。
d. 按荧光扩增仪的标准操作文件对各种标本进行检测。扩增结束后对检验结果进行分析。 e. 记录温湿度计读数。（本区每天在工作前利用本区的温控设备使温度控制在15-25℃之间） f. 作好扩增仪的维护、实验数据的记录、质控记录。 g. 关闭扩增仪，记录运行状态。
h. 实验结束后将已经扩增的反应管放入塑料套袋中密闭后带出，脱下手套、鞋套置于专用污物桶中，
由卫生员清除。
i. 实验完毕打开紫外灯消毒60分钟 4.4核酸扩增操作规程
本实验室使用美国伯乐PTC-200型核酸扩增仪和ABI7300荧光定量检测仪，在此对其操作规范？进行描述
a. 伯乐PTC-200型核酸扩增仪操作
① 开机,打开电源开关，仪器进行自检（约一分钟结束）； ② 运行，显示主菜单，运行一个程序：
从主菜单中选择RUN，按《Proceed》，显示
在“Vessel Type”项中选择，要使用的（管子、微型板和玻片），按《Proceed》； 在“Volume”项中输入样品体积（微升）按《Proceed》；
④ 在“Use heated lid”中选择程序运行过程中是否热盖，按《Proceed》；程序开始运行。
b. ABI 7300型荧光定量检测仪操作
① 打开计算机，打开扩增仪电源开关；双击桌面上“7300 System Software”图标，进入ABI 7300程序界面（图1）；
图1
② 点击
“New document”进入新建实验界面（图2）；
图2
③ 点击
进入模版选择界面（图3）；
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