PCR实验室SOP文件 (7)

⑦ 调整滤光片 ⑧ 打开相应光源

⑨ 接下来打开Quantity One软件，选择File中选GelDoc XR菜单,进入图像采集界面 ⑩ 按下Live/Focus，成像仪进入实时成像

11 选择照明模式，一般荧光样品选择UV,普通透射或反射样品选择White模式 12 仪器面板上有三个上下键按钮：IRIS（光圈），ZOOM（缩放），FOCUS（聚焦），可在软件上直接调节

或在仪器面板上手工调节

13 单击Auto Expose,系统将自动选择曝光时间成像（系统默认0.15%的像素饱和的成像时间为最佳时

间，在Options对话框中可以修改该项设置），如不满意，单击Manual Expose，并输入曝光时间（秒） 14 图像曝光满意后，按下“Freeze”按钮

15 按下“Analyze”按钮，将弹出一个新窗口显示图像，以供分析 16 第5步结束后，也可以按下“Save”键，保存图像

5. 实验结果分析

5.1 实验结果无效的判断标准：出现下述四种情况中的任何一种或多种，当次实验结果不可发，查找原因，重做实验。

① 阴性对照出现扩增。 ② 阳性对照无扩增。

③ 大批甚至所有的标本都扩增了。

④ 室内质控检测结果出现失控情况，实验失控的具体标准详见室内质控标准操作程序。 5.2实验结果有效的判断标准：达到下列要求后，当次实验有效，可以发放结果。

① 阴性对照没有扩增，阳性对照扩增。 ② 室内质控检测结果处于在控状态。 6. 本文涉及以下表格

标本的保存操作程序

1．目的：标本正确保存，以便必要时复查。 2．适用范围：分子诊断室的所有检测标本。 3．负责人： 操作人： 4．程序：

4．1 处理前的标本保存

标本可4℃下短期（24h内）保存，长期保存则需取出棉签，保存于-70℃下。 4．2 报告发出后的标本保存：

a） 提取的核酸标本当天检测可置4℃保存，如当天不检测应置-70℃保存；报告发出后第二周丢弃。 b）原始样本在报告发出后放入低温冰箱-70℃长期保存，以备复查或送检。 c）标本放置低温冰箱保存时须有记录，按编号顺序存放，并由专人负责管理。 4．3 特殊标本的处理：

对暂不检测的项目和规定时间外收到的零散样本，要随时登记和交班，以免漏检，遗失和延误检验。标本一律置于-70℃下长期保存，使用时再按需取出检测。 5. 本文涉及以下图表：

PCR扩增接收标本记录表 拒收标本记录本 标本

超低温保存记录表

PCR标本的采集、运送、接收程序

1．目的：规范待检标本的正确采集、送检和处理。 2．适用范围：分子诊断室的所有检测标本。 3．负责人： 操作人： 4．程序： 4．1 标本的采集

4．1．1 标本由接受过基因扩增检测有关标本采集、保存、运输知识培训的人员采集并送至实验室。 4．1．2标本采集要求

a. 咽拭子：让患者用清水漱口，然后让患者张口发“啊”音，必要时使用压舌板；取出培养管中的拭

子轻柔、迅速地擦拭两腭弓、咽及扁桃体；将拭子插入试管中，塞紧瓶塞；

b. 肛拭子：用棉花拭子在生理盐水中浸湿，插入肛门2-3cm处，自肛门周围皱襞处拭取，或在肛门口

内轻轻旋转涂擦，然后插入盛有生理盐水的试管内；

c. 粪便：采集的粪便务求新鲜，不可混入尿液；一般检查留取少量（5g左右）粪便即可。盛粪便的容

器要求干燥而清洁，不可有消毒剂和防腐剂，最好用一次性便盒。做细菌培养时，应采集于灭菌的粪便培养管内送检（采集标本时，应选择带脓血和粘液部分。如无脓血和粘液，可就粪便表面不同部分及粪端采取。如怀疑霍乱患者的粪便标本的采集。）；

d. 疱疹液：用消毒针将疱疹挑破，然后用棉签蘸取疱疹液，迅速将棉签放入内装有3～5ml保存液（维

持液或生理盐水，推荐使用维持液）的采样管中，在靠近顶端处折断棉签杆，旋紧管盖并密封； 以上操作均需使用无菌器材，并将拭子放入灭菌试管；注明标本留取时间，及时送检。 e. 脑脊液：脑脊液标本的采集量为1.0～2.0ml，采集后，即装入无菌带垫圈的血清管中； 4．2 标本的运送

标本采集后，密闭、标（贴）姓名，应尽可能快的送至检测实验室，如运送时间需2小时以上，必须用冰盒送至实验室。

标本中如加入了适当的稳定剂，如用于RNA测定加入4mol/L异硫氰酸胍盐（GITC）的血清（浆）标本和用于DNA测定的EDTA抗凝血等，则可在室温下运送或邮寄。 4．5 接收

4．5．1严格对各类样本的查对和双签制度，对病房各样本及时进行验收，查对，不符合要求的样本一律退回，并有书面记录。 4．5．2 分类验证 a. 一般内容

进入实验室的样本在进行编号、离心前，工作人员应再次认真查对姓名，编号等。对不符合要求者应作记录，并及时通知送检单位，正确及时地补采样，以免延检测结果报告。对书写不清楚的申请单，要及时与

送检单位联系(可电话)，明确受检者姓名，性别，年龄，地址和发病时间等；并作相应记录。

b. 实验室人员对标本进行查验，出现下表中不合要求的情况时，应拒收标本，登记并告知相关科室。

类别 1 2 3 4 5 6 c. 拒收程序 a）对拒收的不合格标本应在拒收标本记录本上登记。 b）填写不合格标本处置单，并随同申请单送返送检科室。 c）必要时电话告之相关科室医生或护士。 5. 本文涉及以下图表：

PCR扩增接收标本记录表 PCR扩增拒收标本记录表

拒收原因 未正确使用采样液保存的标本 采样液不足（＜3mL） 或过量（>5ml） 标本容器破裂，标本被污染 标本的病人姓名、年龄、性别等与送检单不相符 RNA检测，采样时间超过 2小时 其他可能严重影响检验结果的原因

PCR生物安全防护措施

1．目的：预防工作人员在实验过程中被感染或污染。 2．适用范围：适用于本室所有工作人员。 3．负责人： 操作人： 4．细则：

4．1 实验人员在实施生物防护措施时，应严格遵守各项相应的规章制度，建立起强烈的生物防护意识。 4．2 每天更换废液缸的？2%戊二醛溶液，并保证2%戊二醛溶液用量为废液缸内总液量的五分之一左右。配置消毒液时，正确量取足量的消毒剂（用量杯，保证浓度），水的用量也要正确，缸体密封性良好。 4．3 实验台面日常清洁时使用75%的酒精擦拭。

4．4 每区每次实验后紫外灯照射30～60分钟，如有需要可延长照射时间。

4．5 所有标本均应视作传染源，因此在标本的采集、运输过程中，标本容器应完好无泄漏。 4．6 处理标本时应穿工作服、戴手套，以免沾上皮肤。如手或其它部位的皮肤沾上血液或体液标本以

及试剂，应立即冲洗干净。有下列情况之一者，需另外消毒：手接触有传染性的微生物，水龙头、水池肥皂可能被污染，工作服可能被大量细菌污染。消毒剂可用“84”消毒液。 4．7 在实验过程中，病人标本（血液、体液）或试剂不慎溅入眼内应立即用清水洗。

4．8 实验过程中在使用针具等锐器时，尽量小心防止受伤。若被锐器刺破时，应立即脱下手套，尽量

挤压伤处，使血流出，然后用碘酒、酒精消毒，必要时进行预防补救措施。

4．9 在实验过程中病人标本（血液、体液）外漏时，应立即用2%戊二醛滴上，滤纸或纱布盖上半小时，

然后用酒精擦洗，并用紫外灯消毒。

4．10 实验完毕离开时，应脱下所有该实验区个人防护装备。 4．11 实验完毕后应对实验室进行紫外消毒。

4．12 遇有意外事故应立即报告科室负责人，当事人应立即注射相关疫苗或进行预防性治疗，并进行医学观察，严重者应报告上级领导？。 5. 本文涉及以下表格

紫外消毒车消毒记录表 实验室清洁消毒记录表

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