紫外可见光谱分析实验讲义 - 图文 (5)

（4）标准曲线的绘制

准确吸取芦丁标准溶液1.0mL、1.2mL、1.4mL、1.6mL、1.8mL、2.0mL分别置于10mL容量瓶中，加1%AlCl3 溶液，充分混合至刻度，在波长λ1=463nm、λ2=417nm、λ3=382nm 下分别测得吸光度，计算ΔA值，并计算ΔA与浓度关系的回归方程。

（5）样品中总黄酮含量的测定

取植物叶和果的提取物，测定用1%的AlCl3溶液定容过的黄酮溶液在测定波长下的吸光度值，根据ΔA值，计算总黄酮含量。

五、数据处理

（1）绘制植物叶和果的提取物及芦丁标准品与1% AlCl3显色反应的吸收曲线确定测定波长。

（2）按照公式计算标准曲线的各ΔA值，计算ΔA与浓度关系的回归方程。 （3）由标准曲线计算植物叶和果中的总黄酮含量。

六、注意事项

（1）黄酮类物质广泛存在于各类植物体内，一般采集的各类水果、蔬菜、药材等均含有黄酮类物质。为确定采集的植物体内确有黄酮类物质，可先按照实验步骤1进行黄酮的定性分析。

（2）本实验中的吸收光谱图以刺五加的叶和果与芦丁对照绘制，并确定了λ1、λ2和λ3

的测定波长。实际测定的植物样品，可根据植物提取物与芦丁标准品的吸收光谱图选择各自合适的λ1、λ2和λ3的测定波长。

（3）1% AlCl3溶液的用量在0.5～2.5mL范围内几乎不影响测定结果。

七、思考题

（1）详细推导三波长分光光度法ΔA值的计算公式。

（2）将三波长分光光度法应用于实际样品测定时，如何选择λ1、λ2和λ3的测定波长？

参考文献

[1] [2] [3] [4] [5]

朱明华．仪器分析[M]．北京：高等教育出版社，2008．

黄君礼，鲍治宇．紫外吸收光谱法及其应用[M]．北京：中国科学技术出版社，1992． 陈结，宋启泽．有机波谱分析[M]．北京：北京理工大学出版社，2008． 钱沙华，韦进宝．环境仪器分析[M]．北京：中国环境科学出版社，2004． 张剑荣，戚苓，方惠群．仪器分析实验[M]．北京：科学出版社，2002．

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