实验七 杀虫剂胃毒作用毒力测定 (2)

定数量的目标昆虫，另一个广口瓶中放入定量药剂，用橡皮塞和多个玻璃管把广口瓶连接，震荡，使药剂挥发，气体均匀分散，作用一定时间后，将目标昆虫移入干净器皿中，放入新鲜饲料，盖上纱布，规定时间内观察目标昆虫的中毒死亡情况。 4、药纸熏蒸法：在三角瓶（500-1000ml）的瓶塞上，用大头针固定0.5-1.0cm的滤纸片，在滤纸片上滴加1-2ul的敌敌畏原油或其他熏蒸剂，然后将麻醉的家蝇放入瓶内，盖上瓶塞，25℃温度下，一定时间后，观察试虫的击倒中毒反应。

5、三角瓶法：在三角瓶底部放入含有一定量熏蒸剂的滤纸片（4×4cm），用纱布袋包一定数量的试虫，然后，把布袋固定在瓶塞上，让布袋悬挂在三角瓶中，25℃温度下，一定时间后，观察试虫的中毒和死亡情况。 [实验报告]：

列表记录试验结果，比较各种药剂的毒力并分析哪种供试药剂没有熏蒸作用。

第四部分 除草剂生物测定

除草剂的生物测定技术是指利用生物体（主要指有害生物）对除草剂的反应，来测定除草剂的毒性及效果的基本方法，是发展除草剂生产和使用不可缺少的工作，是研究除草剂特性的重要手段,也是水中、土壤中残留除草剂分析的有用工具。

实验十九 种子萌发鉴定

指示植物的种子（常用黄瓜、高粱、燕麦）在药剂处理过的砂土内萌发，一般不以萌发率作为评判指标，而是在萌发后一定时间内测定根和茎的长度，并以此作评判标准。激素型除草剂，如2，4-D类，一般采用这种方法。在一定范围内，根和茎的伸长和除草剂的浓度呈相关性，因而可用作除草剂的定量测定，灵敏度较高。属于这类的测定方法如下：

1、除草剂培养皿法

培养皿法简单易行。国内大多采用琼脂、土、砂、滤纸为培养基质，用敏感植物的根长抑制率或芽长抑制率与药剂浓度进行回归，

从而测出药剂的EC50。试验中发现培养皿测定土壤处理剂较为合适，但对茎叶处理剂的测定结果与田间试验结果有较大的差异。本试验通过用培养皿法测定土壤处理剂的活性。 [实验材料]

培养皿、滤纸、稗草种子、保鲜膜、光照培养箱、乙草胺 [实验方法] 1、 2、

将稗草种子催芽 3～ 4ｄ，待稗草种子露白后备用。 把甲草胺用水按系列浓度稀释法，稀释成6个不同浓度的

药液。 3、

在铺有一张圆滤纸、直径为9ｃｍ的培养皿中加入各个浓

度的待测药液 5ｍｌ。 4、

精选整齐刚露白的稗草种子8粒于培养皿中，盖好保鲜膜。

每个处理重复 3次。 5、

将培养皿放入ＬＲＨ-2 50Ｇ型光照培养箱 (广东省医疗器

械厂 ),在 2 7℃下培养 4ｄ。 6、

用空白作对照。

[结果整理]

用直尺测量稗草的芽长，精确到毫米。

对照组芽（根）长?处理组芽（根）长?100对照组芽（根）长抑制率（%）=

[实验报告]：记录实验结果，完成实验报告。求出抑制率，并计算EC50 。

2、黄瓜幼苗形态法

黄瓜幼苗形态法是测定激素型除草剂和植物生长调节剂活性的经典方法。测定原理是以不同剂量的药剂所引起黄瓜幼苗形态上的不同变化来测定样品活性。该法具有操作简单，灵敏度高（可测出0.05ppm）的特点。

将样品配成一系列浓度的丙酮溶液，用直径11cm的滤纸在其中浸透，取出吹干，放入直径12cm的培养皿中，再在滤纸上

铺二张同样大小的未浸药的滤纸。挑选饱满度一致黄瓜种子，在5%的漂白粉液中消毒半小时，取出晾干，每皿排放20粒，并加入12ml蒸馏水（据该方法建立者Sudi测定，此时皿内样品的实际浓度比原来浸滤纸时降低10倍），盖好皿盖，置25℃恒温下黑暗培养6天，取出观察黄瓜幼苗的形态。

将2，4-D的一系列浓度下黄瓜幼苗形态画成“标准图谱”（就象化学分析中的标准曲线一样），然后用测定样品的黄瓜幼苗形态去和标准图谱对比，就可确定2，4-D类除草剂的含量或比较待测样品的除草活性大小。

3、高粱法（皿内法）

高粱法适合于非光合作用抑制剂的生物测定。它具有操作简便、培养期间不用管理、周期短，测定范围广，重现性好等优点，因而被国内外许多实验室采用。

先将高粱种子放在湿滤纸上，24℃温度下萌发15~20h，待长出胚芽1~2㎜时取用。配制一系列浓度的待测样品溶液，将16㎜某浓度的样品溶液放入124g石英砂中，仔细拌均。将此湿的石英砂装入9㎝直径的培养皿中，刮平使与皿边对齐。选10粒准备好的萌动高粱种子，排列于砂表面，胚部向上而幼根沿同一方向排成一行，盖上皿中,将培养皿竖立倾斜15度放入24℃温箱,黑暗中经16~18h,将根尖的位置用蜡笔标于皿盖上,经过24h,取出培养皿，从标记处测量根延伸的长度,精确到毫米。

上海植物生理所对此法作了些改进：用直径9㎝的培养皿，装满干燥黄砂，刮平，每皿加入30ml药液，正好使全皿干砂浸透，然后用有10个齿的“齿板”在皿的适当位置轻轻压出10个小坑，以便每皿能排10粒根长1~2㎝（选用根尖尚未长出根鞘者）的萌发高粱种子。为了缩短时间，在排种培养的前1天，让上述准备好的培养皿，置于34℃保温过夜，使砂温提高，8h后即可划道标记幼根起点，再过14~16小时，待对照根长30mm左右即可测量。 吴文君采用小麦种子代替高粱，亦取得满意结果，但对2，4—D类除草剂来说，小麦不如高粱敏感，其灵敏度比高粱差1个数量级。

4、小麦根长法

在直径为 9cm的培养皿内铺满一层小玻璃球（直径为0.5cm），移入10ml不同浓度的待测药液，放入10粒露白的小麦种子，重复三次，以蒸馏水为对照，在20－25℃培养箱中培养5-7 d后取出，测量根长，计算抑制率和IC50值。

本法可用来比较杀单子叶杂草的除草剂间的活力，如氟乐灵、除草通、绿麦隆等。

5、稗草胚轴法

在50ml烧杯中，加入5 ml不同浓度的除草剂溶液，放入10粒发芽整齐、大小一致的稗草籽，在种子周围撒些干净石英砂，以防幼苗浮起。以蒸馏水为对照，重复3次，置于28-30℃恒温箱中培养，4 d后测定稗草胚轴长度，计算IC50。

本法适于测定氯乙酰胺类除草剂，如甲草胺、异丙甲草胺等，灵敏度可达0.01ppm。

6、玉米法

选取玉米种子在20℃下黑暗催芽48h，得胚根长达1—5mm时，选均匀一致的种子，放人装有含除草剂土样的烧杯或培养皿中，保持适宜湿度，在20℃下暗处培养5d后取出，测定根长。以系列标准浓度除草剂处理得到的根长制出标准曲线，将样品处理过的玉米所测结果与之比较，可测出样品中除草剂含量，灵敏度可达0.001ug／g土壤，此外，也可以用玉米根鲜重或干重为指标进行测定。

本法用来测定嗪草隆（Glean）等。

7、琼脂测定法：

该法在40年代末提出，国内80年代才有报道，90年代才有采用。琼脂测定法适用于酰胺类，二硝基苯胺类，氨基甲酸脂类，均三氮苯类等多种除草剂的测定，也可用于农药混用试验。 方法：将药剂定量地混入溶化的琼脂液中，倒入试管或培养皿中，待其凝固后再播入供试植物的种子，生长到一定程度后再测定。该法的伏点是以琼脂代替土壤，既可与药剂均匀混合，又可起到固定供植物的作用。

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