大肠杆菌和农杆菌感受态的制备(2)

来源：用户分享时间：2021-06-01 本文由

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感受态制备

B 大肠杆菌DH5α感受态的制备（《褐飞虱胰蛋白酶基因的克隆、异源表达及产物的生化特性研究》第9页）

1、将置于液氮（-80℃）保存的大肠杆菌在LB平板上划线，37℃培养活化。

2、挑取经活化的大肠杆菌单菌落于NZY液体培养基，18℃，200-250rpm培养。

3、当OD600=0.7-1.0时，用预冷的50mL离心管，4℃，4000离心10min，收集菌体。

4、用-20℃预冷的TB Buffer重悬菌体,4℃，3000离心10min，收集菌体

5、重复步骤4

6、用8mL预冷的TB Buffer重悬菌体,缓慢加入DMSO(二甲基亚砜)至浓度7%。

7、冰浴10min，分装保存于液氮中备用。

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