蛋白质组学答案终稿(15)

山师限选课答案

术利用一种人工合成的化学试剂，预先选择性地标记某一类氨基酸残基，分离富集被标记的肽段后，质谱鉴定。根据质谱图上不同同位素标记亲和标签试剂标记的一对肽段离子的强度比值，定量分析比较样本的相对丰度并进行质谱鉴定分析。

ICAT进行了许多改进，首先用[13C/12C]代替[1H/2H],消除液相分离的同位素效应。其次，引入质谱分析前，生物素亲和标签可被切割掉（酸切割和光切割）亲和子部分，减少了生物标签的分子质量，降低了由于标签引入蛋白质样品中可能带来的误差。第三，由Zhou等开发的固相ICAT试剂，它与液相ICAT试剂相比，具有快速、简便、高效等特点。

同位素标记亲和标签技术的特点：①能够兼容分析体液、细胞和组织中绝大多数蛋白质；②烷基化反应即使在有盐、去垢剂以及稳定剂存在下都可以进行；③只需分析半胱氨酸残基的肽段，降低了分析的复杂性；④允许任何类型的免疫、物理分离方法，能很好的定量分析微量蛋白质。 缺点： ①过量的标记或者任何内源的生物素都会由于彼此的竞争而影响亲和的效率；②亲和洗脱以后获得被标记的肽段如果和非标记的肽段质量相等，就会造成假阳性或者假阴性的结果；③通过特异亲和半胱氨酸标签，也许不能完全覆盖蛋白质信息，特别是对那些含有相对较少半胱氨酸的蛋白质；④通过选择性亲和吸附标签肽段很可能导致肽段丰度信息的丢失。

同位素标记相对定量和绝对定量（iTRAQ）试剂

（1）原理 同位素标记相对定量和绝对定量（isobaric tags for relative and absolute quantitation, iTRAQ）技术是一种新的、功能强大的可同时对4种样品进行绝对定量和相对定量的研究方法。

iTRAQ试剂为可与氨基酸N端及赖氨酸侧链连接的胺标记同重元素（isobaric）。同位素标记相对定量和绝对定量试剂由3部分组成，即一端的报告部分—报告基团、中间的质量平衡部分—平衡基团、另一端的肽活性反应部分—肽活性反应基团（NHS树脂）。

肽活性反应部分把同位素标记相对定量和绝对定量试剂与肽N端及赖氨酸侧链连接，几乎可以标记样本中的所有蛋白质。平衡部分保证同位素标记相对定量和绝对定量标记的同一肽段的质荷比相同。

优点：

iTRAQ 标记物能够标记肽段N末端，受标记位阻的影响小。 iTRAQ明显好处：能够标记不

含CyDye（Cy2、Cy3、Cy5）染料标记位点的肽段。

缺点：

样本需用胰酶消化裂解，在样本处理时出现误差。因此，保证同位素标记相对定量和绝对

定量前期样本处理条件的一致性很重要。

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蛋白质组学研究方法

双向凝胶电泳，生物质谱技术，生物传感芯片质谱，ICAT技术，蛋白质芯片，酵母双杂交系统，噬菌体展示技术，串联亲和纯化，生物信息学方法。

基因组学研究方法:

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