大肠杆菌O104核酸扩增(pcr-荧光探针法)试剂盒说明书

大肠杆菌O104核酸扩增(pcr-荧光探针法)试剂盒说明书

大肠杆菌O104核酸扩增（PCR-荧光探针法）检测试剂盒

【产品名称】

中文名称：大肠杆菌O104核酸扩增（PCR-荧光探针法）检测试剂盒 英文名称：Real Time PCR diagnostic kit for Escherichia coli O104 【包装规格】

20次/盒 【预期用途】

用于临床样品以及环境样品中的大肠杆菌O104的检测。 【检测原理】

试剂盒采用taqman荧光探针的技术，在反应过程中大肠杆菌O104特异的荧光探针跟靶核酸杂交, 同时被Taq酶水解, 把探针上的荧光基团和淬灭基团分开, 从而通过荧光增量来实时判断大肠杆菌O104的存在。 【产品组成】

ABI、Roche、MJ、Bio-rad、Eppendorf等多种全自动荧光定量PCR检测仪 【实验操作】

1． 基因组提取

（1）取培养后的菌液约1.5ml，12000rpm离心2min，弃上清。

（2）加入200μl无菌水，充分混匀，12000rpm离心2min，弃上清。

（3）加入80μl裂解液，用移液器吹吸混匀，50℃水浴1小时，100 ℃水浴15分钟，冰上

放置10分钟后12000rpm离心3min。 （4）取上清液用于PCR检测。

2． 荧光定量PCR检测

（1）按下列组份配制反应液（反应液配制请在冰上进行）

大肠杆菌O104荧光PCR反应液： 7.4μl Taq酶： 0.3μl 样品DNA或阴阳性对照品： 5μl DEPC H2O： 12.3μl （2）PCR扩增

95℃ 2 min 95℃ 60℃ 1min 荧光检测在60℃，反应体系为25μl，荧光通道选用FAM通道。 【结果判读】 1． 基线的设定

（1） 对于ABI系列仪器，分析前把参比荧光定为none，如果没有Ct<16的强阳性标本，就

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