非律平和制霉菌素对人羊膜上皮细胞鞘脂类代谢的影响

目的 研究脂类干扰剂非律平和制霉菌素对人羊膜上皮细胞鞘脂类代谢的影响是否相同。 方法?┯τ没?质辅助激光解吸附飞行时间质谱分析方法分析不同剂量非律平和制霉菌素对人FL细胞株鞘脂类代谢的影响。 结果 非律平和制霉菌素均可影响FL细胞鞘脂类代谢,但是非律平(0.2 和10 μm

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２００７年１０月；２１（５）：４１６－４２１

ＣｈｉｎＪＰｈａｒｍａｃｏｌＴｏｘｉｃｏｌ２００７　　Ｏｃｔ；２１（５）：４１６－４２１

中国药理学与毒理学杂志

非律平和制霉菌素对人羊膜上皮细胞鞘脂类代谢的影响

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刘广义１，马小琼２，沈　静２，董正伟１，杨　军１

（浙江大学１．公共卫生学院毒理学系，２．医学院病理及病理生理学教研室，浙江杭州　３１００５８）摘要：目的　研究脂类干扰剂非律平和制霉菌素对人羊膜上皮细胞鞘脂类代谢的影响是否相同。方法应用基质辅助激光解吸附飞行时间质谱分析方法分析不同剂量非律平和制霉菌素对人ＦＬ细胞株鞘脂类代谢的影响。结果　非律平和制霉菌素均可影响ＦＬ细胞鞘脂类代谢，但是非律平（０．２和１０μｍｏｌ·

Ｌ－１

）诱导了多种新的神经酰胺类分子的合成，推测

主要影响神经酰胺类分子的代谢。而制霉菌素（

０．０５４和０．１０８μｍｏｌ·Ｌ－１

）在诱导了新的神经酰胺分子合成的同时，还导致鞘磷脂含量的增高，０．１０８μ

ｍｏｌ·Ｌ－１

可诱导更多神经酰胺分子的合成，推测制霉菌素可能对鞘磷脂类分子和神经酰胺类分子的代谢都有影响。结论　非律平和制霉菌素均干扰鞘脂类代谢，但二者的靶点可能不同。

关键词：非律平；制霉菌素；脂类组学；神经酰胺类；鞘磷脂类

中图分类号：Ｒ３９４．６，Ｒ９７８．１文献标识码：Ａ

文章编号：１０００?３００２（２００７）０５?０４１６?０６

鞘脂类（ｓｐｈｉｎｇｏｌｉｐｉｄｓ）作为一种以鞘胺基为基础的脂类，在当前的研究中越来越受到大家的关注。作为脂筏（ｌｉｐｉｄｒａｆｔ）的主要组成部分，它们为膜蛋

白的相互作用提供了平台［

１］

。此外，鞘脂类和它的代谢产物，如鞘胺醇（ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ）、神经酰胺（ｃｅ?ｒａｍｉｄｅ）和鞘磷脂（ｓｐｈｉｎｇｏｍｙｅｌｉｎ）等可以作为第二信使发挥生物功能，参与了许多重要的信号传导通

　　收稿日期：２００６?１１?０１　接受日期：２００７?０１?３１　　基金项目：国家自然科学基金（３０３００２７７）；国家自然科学基金（３０４７１９５６）；国家自然科学基金（３０６００２２０）资助项目　　作者简介：刘广义（１９８１－），男，河南省商丘市人，硕士研究生，研究方向为细胞应激反应中的脂类组学研究。　　?联系作者　Ｅ?ｍａｉｌ：ｇａｓｔａｔｅ＠ｚｊｕ．ｅｄｕ．ｃｎ　Ｔｅｌ／Ｆａｘ：（０５７１）８８２０８１４０

路，对细胞的分化、增殖和死亡［２－３］

，钙的动态平衡，肿瘤的发生，抗药性的产生和治疗［４－５］以及细菌和病毒的感染过程［６－７］等都有重要的调节作用。

但是很长时间以来，脂类的研究远远落后于基因和蛋白质的研究。一个最主要的原因就是缺乏一种精确的、高通量的脂类分析方法。传统的分析方法（如同位素标记、薄层层析和高效液相色谱等）虽可提供部分信息，但很不充足。比如，利用同位素标记及薄层层析，发现烷化剂甲基硝基亚硝基胍（Ｎ?ｍｅｔｈｙｌ?

Ｎ′?ｎｉｔｒｏ?Ｎ?ｎｉｔｒｏｓｏｇｕａｎｉｄｉｎｅ，ＭＮＮＧ）可诱导神经酰胺的生成并介导凋亡［２，８］。但是，由于神经酰

胺可有不同的侧链长度、不饱和键数量、构像及手性等，具体发生变化的是哪一种或几种无法得知。这一问题直到将质谱技术应用在脂类研究才得到了解决。近年来，一个新的概念脂类组学（ｌｉｐｉｄｏｍｉｃｓ）被提出，即利用质谱技术对脂类组（ｌｉｐｉｄｏｍｅ）的所有

成分进行一次性的定性鉴定并定量［９－１２］

。与传统

的分析方法比较，质谱技术通量高，最重要的是可以鉴定出各种类别的脂类分子。利用这一技术，我们已研究了ＭＮＮＧ对细胞鞘脂类代谢的影响，发现ＭＮＮＧ可导致多种神经酰胺和鞘磷脂分子的改

变［

７，１３］

。在鞘脂类研究中，各种脂类代谢干扰剂是理解鞘脂类代谢通路所必需的研究工具。大环内酯类多烯型抗生素非律平（ｆｉｌｉｐｉｎ）和制霉菌素（ｎｙｓｔａｔｉｎ）主要用于治疗真菌类感染，它们可以和细胞中的胆固醇结合，形成复合体，从而导致细胞结构的改变，特别是可以干扰细胞的脂筏结构。因此它们是经常使

用的干扰细胞脂筏的药物［１４－１６］

。然而它们具体干

扰细胞的哪些鞘脂类代谢，以及如何干扰还没有明确的答案。此外，二者是否影响相同的或不同的鞘脂类也还不清楚。因此，本研究利用脂类组学方法研究它们对细胞鞘脂类，尤其是神经酰胺和鞘磷脂类的影响，以分析它们发挥作用的不同途径。

目的 研究脂类干扰剂非律平和制霉菌素对人羊膜上皮细胞鞘脂类代谢的影响是否相同。 方法?┯τ没?质辅助激光解吸附飞行时间质谱分析方法分析不同剂量非律平和制霉菌素对人FL细胞株鞘脂类代谢的影响。 结果 非律平和制霉菌素均可影响FL细胞鞘脂类代谢,但是非律平(0.2 和10 μm

中国药理学与毒理学杂志　　２００７年１０月；２１（５）１　材料与方法

１．１　材料

人羊膜上皮细胞株ＦＬ为本实验室保存。ＭＥＭ培养基（Ｅａｇｌｅ′ｓｍｉｎｉｍｕｍｅｓｓｅｎｔｉａｌｍｅｄｉｕｍ）、Ｌ?谷氨酰胺、小牛血清：美国Ｇｉｂｃｏ公司。二甲亚砜（ＤＭ?ＳＯ

）、非律平、制霉菌素、乙酸乙酯（ｅｔｈｙｌａｃｅｔａｔｅ）和２，５?二羟基苯甲酸（２，５?ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｌ?ｂｅｎｚｏｉｃａｃｉｄ，２，５?ＤＨＢ）：美国Ｓｉｇｍａ公司。Ｖｏｙａｇｅｒ?ＤＥＳＴＲＭＡＬ?ＤＩ?ＴＯＦ质谱仪：美国ＡＢＩ公司。真空抽干机：美国Ｓａｖａｎｔ公司。１．２　细胞培养和处理

培养液包含ＭＥＭ、１０％小牛血清、０．０３％Ｌ?谷

氨酰胺、１０ｋＵ·Ｌ－１青霉素和１２５ｍｇ·Ｌ－１链霉素。处理条件如下：１×１０７个细胞接种于细胞培养瓶中，

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