粗蛋白含量的测定(凯氏定氮仪测定)
蛋白质含量测定(凯氏定氮法)
1 原理
蛋白质是含氮的有机化合物。食品与硫酸和催化剂一同加热消化,使蛋白质分解,分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离,用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定,根据酸的消耗量乘以换算系数,即为蛋白质含量。
2 试剂及其配制
硫酸钾(分析纯)、五水硫酸铜(分析纯)、浓硫酸(分析纯)、40%NaoH溶液(400g/L)、蒸馏水
0.1N盐酸标准溶液:量取9mL盐酸加适量水稀释至1000mL。
4%硼酸:取40g硼酸加水适量溶解后,定容至1000mL容量瓶中。
指示剂:甲基红0.1g,溴甲酚绿0.1g,混合定容至100ml 95%乙醇中,在滴定中加2~3滴于硼酸中。
3 仪器
消化炉、半自动凯氏定氮仪、天平(0.1mg、0.1g)
4 分析步骤
4.1 称1g(精确至0.1mmg)左右样品于消化管中;
4.2 加7g硫酸钾和0.8g五水硫酸铜;
4.3 加12mL浓硫酸,慢慢地摇动,将样品用酸浸湿;
4.4 将涤气装置接在支架中的消化管上,将水抽气泵水龙头全开;
4.5 将装有涤气装置的消化管连支架放入消化器中;
4.6 5min后调小抽气泵水流,使酸恰好吸入涤气罩头;
4.7 继续消化直至全部样品变为透明的蓝绿色澄清液体,根据样品种类,消化时间大约在30~60min之间(将温度升到420℃时开始计时);
4.8消化完毕,将装有涤气装置的消化管连支架一起从消化器中取出冷却15-20min;
4.9 在每个消化管中加入25mL蒸馏水;
4.10 将30mL接受液加入锥形瓶再加2滴甲基红-溴酚绿指示剂,放入蒸馏器升起持瓶台后,使馏出液出口浸入接受液;
4.11 将消化管放入蒸馏器,关上安全门;
4.12 加60mL 40% NaoH加入消化管后进行蒸馏;
4.13 接受瓶中的溶液呈绿色,表示有碱-氨存在。
4.14用标准盐酸溶液滴定馏出液至蓝/灰色为滴定终点,记录盐酸溶液用
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