二可溶性总糖的测定（蒽酮比色法）

摘要： 一、目的 掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。 二、原理 强酸可使糖类脱水生成糠醛，生成的糠醛或羟甲基糖醛与蒽酮脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色，该物质在 620 nm 处有最大吸收 . 在 10 -100 一、目的

掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法. 二、原理

强酸可使糖类脱水生成糠醛,生成的糠醛或羟甲基糖醛与蒽酮脱水缩合,形成糠醛的衍生物,呈蓝绿色,该物质在 620 nm 处有最大吸收 . 在 10 -100ug 范围内其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比.

这一方法有很高的灵敏度,糖含量在 30ug 左右就能进行测定,所以可做为微量测糖之用.一般样品少的情况下,采用这一方法比较合适. 三、仪器、试剂和材料

1 、仪器

（1）分光光度计 （2）电子顶载天平

（3）三角瓶： 50m1 X 1 （4）大试管： 9 支 （5）试管架,试管夹 （6）漏斗,漏斗架

（7）容量瓶： 50rnl X 2

（8）刻度吸管： 1m1X3 ， 2m1X1 ， 5mlX1 （9）水浴锅

2、试剂

（1）葡萄糖标准液： l00ug/ml （2）浓硫酸

（3）蒽酮试剂 :0.2g 蒽酮溶于 100 ml 浓 H2SO4 中当日配制使用. 3、材料 小麦分蘖节。 四、操作步骤

1 、葡萄糖标准曲线的制作

取 7 支大试管,按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液：

管号 1 2 3 4 5 6 7 葡萄糖标准液（ ml ） 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8 蒸馏水（ ml ） 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.4 0.2 葡萄糖含量（ ug ） 0 10 20 30 40 60 80

在每支试管中立即加入蒽酮试剂 4.0m1 ,迅速浸于冰水浴中冷却,各管加完后一起浸于沸水浴中,管口加盖玻璃球,以防蒸发.自水浴重新煮沸起,准确煮沸 l0min 取出,用流水冷却,室温放置 10min ,在 620 nm 波长下比色.以标准葡萄糖含量（ ug) 作横坐标,以吸光值作纵坐标,作出标准曲线.

2 、植物样品中可溶性糖的提取

将小麦分蘖节剪碎至 2mm 以下,准确称取 Ig, 放入 50m1 三角瓶中,加沸水 25m1 ,在水浴中加盖煮沸 10min ,冷却后过滤,滤液收集在 50m1 容量瓶中,定容至刻度.吸取提取液 2m1 ,置另一 50m1 容量瓶中,以蒸馏水稀释定容,摇匀测定. 3、测定

吸取 lml 已稀释的提取液于大试管中,加入 4.Oml 蒽酮试剂,以下操作同标准曲线制作.比色波长 620nm ,记录吸光度,在标准曲线上查出葡萄糖的含量（ ug ）. 查表所得糖含量（ ug ）×稀释倍数 五、结果处理 六、注意事项

1、该显色反应非常灵敏,溶液中切勿混入纸屑及尘埃. 2、 H 2 SO 4 要用高纯度的.

3、不同糖类与蒽酮的显色有差异,稳定性也不同.加热、比色时间应严格掌握. 七、思考题

1、用水提取的糖类有哪些？

2、制作标准曲线时应注意哪些问题？

实验步骤

1． 求标准曲线方程

取6只试管，按下表配制（移取）葡萄糖（G）标准溶液，沸腾7分钟取出，用自来水冷至室温，用721分光光度计比色，波长620nm，1＃管作为参比(保留)，求标准曲线方程。（G浓度为200μg／mL，蒽酮试剂：2克蒽酮／每升85%H2SO4）

2. 样品含糖量的测定

（1）取菜叶（包菜和白菜两个样）准确称取1.00克剪碎研细后，放入大试管，加入25mL蒸馏水，煮沸10分钟，通过漏斗滤入250mL容量瓶中（可以抽滤），并用煮沸蒸馏水提取两次，滤液并入容量瓶中，滤纸上的残渣用水冲两次，冷却定容至刻度。

（2）吸取0.5mL滤液于编号的三只试管中，以蒸馏水补足1.00mL；另吸取1.00mL滤液于另编号的三只试管中，加蒽酮试剂5.0mL（于冷水浴中操作），摇匀后于沸水浴中煮沸7分钟，取出冷却至室温，以求标准曲线的1＃管作为参比，用721分光光度计在620nm处测吸光度或透过率。

最小二乘法求标准曲线方程的公式：

X：G的浓度（μg／mL）Y：吸光度A＝－㏒T 本实验要求相关系数r≥0.99

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