MTT法观察细胞生长曲线

MTT法绘制生长曲线

一 细胞生长曲线：

A、目的：学习细胞生长曲线的测定方法，观察细胞生长基本规律。

B、背景知识

细胞生长曲线是观察细胞生长基本规律的重要方法。只有具备自身稳定生长特性的细胞才适合在观察细胞生长变化的实验中应用。因而在细胞系细胞和非建系细胞生长特性观察中，生长曲线的测定是最为基本的指标。

原理（选填项目）：

细胞生长曲线的测定一般可利用细胞计数法进行。

C、材料

（一）仪器

1. 净化工作台

2. 离心机

3. 恒温水浴箱

4. 冰箱（4℃、-20℃）

5. 倒置相差显微镜

6. 培养箱（37℃、5%CO2、饱和湿度）

（二）玻璃器皿

1. 吸管（弯头）

2. 培养瓶

3. 玻璃瓶（250ml、100ml）

4. 废液缸

（三）塑料器皿

1. 吸头

2. 枪头

3. 24培养板

4. 胶塞

（四）其他物品

1. 微量加样枪

2. 红血球计数板

（五）试剂

1. D-Hanks液

2. 小牛血清

3. RPMI1640

4. 双抗（青霉素、链霉素）

5. 0.08%胰酶

（四）、操作步骤

1. 取生长状态良好的细胞，采用一般传代方法进行消化，制成细胞悬液；

2. 计数，精确地将细胞分别接种于21～30个大小一致的培养瓶内或培养孔（以24孔培养板为宜），每瓶或孔细胞总数要求一致，加入培养液的量也要一致。

3. 每天或每隔一天取出3瓶（孔）细胞进行计数，计算均值。培养3～5d常要给未计数的细胞换液。

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