膜片钳技术SOP(2)

药品和试剂：

根据不同的实验设计选择不同的药品和试剂。

主要仪器设备与材料：

① 屏蔽防震实验台(TMC 63-544)

② 数字式超级恒渐浴槽（HSS-1 CHENDU INSTRUMENT China）

③ 微管电极拉制器（PP-83 NARISHIGE Japan）

④ 微管电极抛光仪（ME-83 NAEISHIFE Japan）

⑤ 电子刺激器（SEN-2030, NIHON KOHDEN, Japan）

⑥ 膜片钳放大器（AXOPATCH 200B Axon Instruments U.S.A）

⑦ 倒置相差显微镜（AXIOVERT 135 ZEISS Germany）

⑧ 计算机（PⅢ 800）

⑨ A/D、D/A转换器（DIGIDATA-1200 Axon Instruments U.S.A）

⑩ pClamp软件（10.0）Axon Instruments U.S.A )

实验对象：

兔、大鼠、猪、和人的组织细胞（直径小于30μm的细胞），都可用于膜片钳实验。动物由泸州医学院（许可证号：SYXK（川）2008-063）提供；人体组织来源于临床手术丢弃物。本SOP以猪冠状动脉平滑肌细胞为例，选取体重约120～150 Kg的猪，雌雄不拘，猪心脏购自泸州市屠宰场。

实验环境：

常温（22oC）下进行, 湿度（70-80%）

操作步骤：

1.液体配制

主要根据研究通道的不同，所用细胞的不同，配制相应的液体，可参考相应的文献进行调整。包括：电极液；细胞外液等。基本原则是保持2个平衡，渗透压平衡和酸碱平衡。另外，所有液体在使用前必须过滤，以保持液体洁净。（ 详见细胞的分离与培养SOP：LY-XJD-SYJS-014/015）

2.标本制备

膜片钳实验一般是在单个细胞上进行。实验用单细胞主要来自培养细胞或急性酶分离的细胞，也可来自脑片细胞中的原位细胞。常用的酶是胶原酶和蛋白酶，

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