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基因功能分析的基本策略(2)

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RNA干涉的机制: 在植物、动物和人的细胞内存在着无活性或低活性的被 称为Dicer的由核酸内切酶和解旋酶等组成的酶复合体。 当细胞内出现异常双链RNA时,如病毒RNA,可以激活 Dicer,被激活的Dicer识别并将其切割成短的双链RNA, 同时生成的短的双链RNA又可以进一步激活Dicer,并 与之结合,形成的复合物称为RNA诱导的沉默复合物。 该复合物通过Dicer中的解旋酶将短的双链RNA变成互 补单链RNA,此单链RNA即可识别并结合到细胞内与其 互补的靶RNA分子上,并通过Dicer中的核酸内切酶将 靶RNA切割,使其失去功能。RNA干涉可以被认为是机 体的一种防御机制。

dsRNA

形成复合物

Dicer

靶RNA

RNA干涉技术的基本过程 1、确定干涉靶点 选择目标基因是进行RNA干涉的第一步,根据靶基

因序列,确定干涉的具体靶点。一般作为干涉的靶点序列应具备:①、目标RNA上 被干涉的靶点应尽量避开蛋白结合位点②被干涉的靶序

列一般应具有AA(N19)TT或AA(N21)序列特征,同时G:C比为50%左右③被干涉的靶序列应该是特异 性的,和其它RNA没有同源性。

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