Trizol法提取RNA-电子版

Trizol法提取RNA步骤

1． 胰酶消化六孔板细胞（每孔相当于3.5cm皿），每孔细胞收于EP管中，PBS洗一遍（或

弃旧培养基，1ml PBSA洗2遍，直接向孔中加入600ul Trizol，吹打细胞，并吸入EP管中即可，无需胰酶消化）；

2． 向细胞沉淀中加入600ul Trizol裂解细胞5min；

3． 加入三氯甲烷（氯仿）120ul（V三氯甲烷：VTrizol=1:5）提取核酸； 4． 振荡10s至粉红色出现时停止，室温静置2~3min后分层； 5． 4℃，12000×g，离心15min，离心后，底部为细胞碎片，中间为DNA，上层为RNA产

物；

6． 吸取上层液相RNA提取液，置另一个EP管中（小心勿吸到沉淀，约为250~300ul）； 7． 每管加入异丙醇300ul（V异丙醇：VTRIZOL=1:2）（异丙醇为有机溶剂，根据相似相溶原理，

RNA不溶于其中，其他杂质溶于其中）； 8． 上下颠倒，轻轻混匀，室温下静置10分钟； 9． 4℃，12000×g，离心10分钟，弃上清； 10． 用800ul 75%乙醇（用1‰DEPC处理水配制）洗沉淀，振荡器振荡15秒钟； 11． 4℃，12000×g，离心5分钟，弃上清（挥发乙醇2分钟）； 12． 每管加入20~60ul DEPC处理水（示沉淀量而定），金属浴60℃溶解5分钟； 13． 4℃，12000×g，离心5分钟，吸取上清置于新的EP管中，-80℃冻存；

注意：EP管、移液器头用1‰DEPC水（不能高压灭菌）浸泡过夜，甩干后高压灭菌。DEPC处理水配制：999ul+1ul DEPC，高压灭菌。

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