谷子肌动蛋白基因的克隆及序列分析(4)

以谷子(Setaria italica)为材料,提取总RNA。根据植物肌动蛋白基因编码区的两端的保守序列设计了简并引物,用5'RACE方法扩增出了谷子肌动蛋白基因编码区序列。以豌豆肌动蛋白cDNA作探针进行的Southern杂交分析表明扩增出了目的基因。将所获得的片段克隆到T载体后进行测序,

"期李园莉等：谷子肌动蛋白基因的克隆及序列分析">"此克隆插入有目的基因片段；利用载体上的多克隆位点进行双酶切分析，结果如图!（泳道"、。!）

表明用!"##$$#%#双切时目的片段被切成约%&&和"&&’(的条带，从而推测序列内含有!"##或$#%#

位点。

图!)*+,-)扩增结果及阳性克隆的筛选

"#$%!)*+,-)./012345607.//5859:;(:0838</

72:5/0=>，?@A$&’()"+*%+)#B4.C/.0；D，!)*+,-)(.:6173；"，’21/72:5/；!，EF83/72:5/；

G，(HIB+GJ;（K）

(240L86图&)*+,-)产物的M:13F+/.5杂交鉴定"#$%&M:13F/.5’2:338594542+N080:;)*+,-)(.:6173=-O，

?@A$&’()"+*%+)#；>，!

)*+,-)(.:6173!’(测序结果

由图G可见，我们获得了谷子肌动蛋

白基因的编码区序列，它长度为>>">个核

苷酸，编码"QQ个氨基酸。

&序列分析与讨论

&’*谷子肌动蛋白7?@A序列酶切位点分

析表明在D%%’(位置处存在一$#%#酶切

位点（G’），印证了此前（D=G）的HAH-*-"’

推测。

&’!相似性比较

自I2P8594等（>RQ"）解译出第一个肌动

蛋白的氨基酸序列后，目前在H/5S45C中图)阳性克隆的,-)及酶切鉴定注册的肌动蛋白基因或片段达到D&RDT个。"#$%),-)456/5PNL/689/038:5:;(:0838</72:5/(240+将本文所得序列（B#A7）与H/5S45C中的其L86

>=!?@A$&’()"+*%+)#B4.C/.0；D=,-):;(:0838</它生物的肌动蛋白基因序列进行了相似性72:5/；"=6:1’2/689/03/6’N!"##$$#%#；!=6:1’2/68+

比较，发现其相似性均在T&U以上。在禾9/03/6’N,%+#$,+-#；G=,1.8;8/6(:0838</(240L86本科内，（AVD"!!&&，的核苷酸序列的相似性为R&U；与高粱（WQR"Q%）B#A7与大麦>&G&53）

的相似性为%!U，与水稻（W>TD%&）的相似性为%"U。

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