11 凝胶过滤法分离纯化大豆蛋白肽

第22卷第1期 齐 齐 哈 尔 大 学 学 报 Vol.22,No.1 2006年1月 Journal of Qiqihar University Jan.,2006

凝胶过滤法分离纯化大豆蛋白肽

邹存媛 郑永杰 卢 鹤

（齐齐哈尔大学化学与化学工程学院，齐齐哈尔大学161006）

摘 要：本文采用中性蛋白酶AS1.398水解大豆蛋白，通过正交实验确定最佳水解条件：水解温度、pH值分别为，酶用量为6%，酶解时间为4h，此时水解度（DH）达到24.57%。并对水解48℃和7.5，底物浓度为5%（W/V）

产物进行脱苦脱色，然后采用超滤以及凝胶过滤色谱法分离分子量1200以下的小肽并收集。 关 键 词：大豆肽；酶水解；超滤；凝胶过滤

中图分类号：O658.1 文献标识码：A 文章编号：1007-984X(2005)04-0027-04

本文研究的大豆肽是指大豆蛋白质经过水解、分离、精制等过程而获得的通常由3～6个氨基酸组成的、相对分子质量低于1000的低肽混合物。肽类的相对分子质量主要分布在300～700范围内，其中还含有少量的游离氨基酸、糖类、无机盐等成分。

过去的研究认为，蛋白质在体内是经体内蛋白酶水解成氨基酸形式被吸收的。最近的研究表明，蛋白质在体内消化后并不完全以氨基酸形式被吸收，也可是以寡肽(尤其是二肽、三肽)形式被吸收。据资料报道，小分子大豆肽不仅具有很好的溶解性、低粘度、抗凝胶形成性，而且在体内消化吸收快，蛋白质利用效率高；大豆肽具有低抗原性，不会产生过敏反应，能增强运动员体能和肌肉，促进肌红细胞复原，帮助恢复疲劳；能促进脂肪代谢，消除过多脂肪;还能促进发酵作用，产生有益分泌物；另外，大豆肽具有生理活性(抗氧化性)等。为此，可将大豆肽应用于酸性饮料和保健饮料，也可应用于病员食品、运动员饮料、婴幼儿食品或特殊人群食品(如减肥食品)等。

本实验选择一种对功能性好的肽段具有良好选择性的酶对大豆蛋白进行水解，并对水解产物进行分离，获得小肽，为制得小肽产品提供依据。

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1 材料与方法

1.1 材料

大豆分离蛋白；AS1.398中性蛋白酶，购于无锡酶制剂厂；葡聚糖凝胶G15，购于上海亚东核级树脂有限公司；NaOH（分析纯）；HCL（分析纯）；磷酸二氢钠（分析纯）；磷酸氢二钠（分析纯）

1.2 主要实验仪器

HZS-H水浴振荡器；PHS-25型酸度计；80-2型离心沉淀机；BS110S型电子天平；超滤装置；BSI-100自动部分收集器；722-光栅分光光度计；1000µL微量进样器

1.3 测定方法

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水解度计算（DH）：（pH-Stat法）；蛋白含量测定采用folin-酚法

1.4 酶水解实验

1.4.1 正交实验因素的选择

影响酶水解速度的因素很多，如反应温度、pH值、底物浓度、酶用量等。给定的酶水解温度和pH值是一定的，根据单因素实验确定酶的最适水解温度48℃和pH值为7.5。 收稿日期：2005—06—29

作者简介：邹存媛，女，硕士研究生，主要从事分析化学与生物化学的研究工作。

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