生物技术专业大实验实验指导 (5)

1.将手洗净，用75%酒精将手消毒，再进入超净工作台开始接种操作 2.点燃酒精灯，将镊子在酒精灯下烤干 3.取一无菌培养瓶，打开烧瓶口

4.用无菌镊子从已培养的长春花愈伤组织中

5.取出2mm2左右的愈伤组织5块，分别接种在新的MS培养基上 6.快速封好瓶口，用记号笔写上姓名和接种日期 7.接种后的三角瓶置于25°C条件下，黑暗培养

八、思考题

怎样保证愈伤组织传代过程中不被污染？

九、实验报告

填写长春花愈伤组织诱导情况统计表

编号 1 2 3 4 每瓶接种数 愈伤组织成活率（%） 愈伤组织的状态（颜色、状态） 污染率（%） 要求学生在实验之前认真阅读实验指导及相关资料，进行归纳总结，完成实验预习报告。实验过程中，认真记录实验步骤，观察实验现象，记录实验结果。实验报告的内容包括：（1）实验目的；（2）实验原理；（3）生物材料、试剂、实验仪器；（4）实验步骤；（5）实验结果和分析；（6）思考题。要求学生在实验指导及实验操作的基础上，独立进行归纳总结，完成一份内容完整、条理清晰、重点突出的实验报告。

十、注意事项及其它说明

规范使用实验仪器，并注意电源安全。

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实验十三 微藻规模化培养

一、实验目的

了解海洋微藻的生长环境及其生物活性物质的应用，观察海洋微藻的形态 二、实验内容 利用生物反应器生产微藻

三、实验要求

集中授课

四、实验准备

在进行实验之前，要求学生在对课堂相关知识点理解和掌握的基础上，认真阅读本实验指导，并进行归纳总结，完成预习报告。

五、实验原理、方法和手段

海洋微藻是海洋生态系统中的最主要初级生产者,也是海洋生物资源的重要组成部分，具有种类多、数量大、繁殖快等特点,在海洋生态系统的物质循环和能量流动中起着极其重要的作用。微藻本身营养丰富,富含蛋白质，可以作为单细胞蛋白（SCP）的一个重要来源，同时微藻含有丰富的生物活性物质,尤其是一些有独特医疗功效的物质（如β-胡萝卜素、藻兰素等色素类、抗生素类、抗病毒类、抗真菌类、细胞毒素和抗癌类，还有微藻脂肪酸、多糖、维生素、甾醇等），它们对生物体内的代谢过程和各种生化反应有活性作用，对人类的多种疾病（如肿瘤、癌、心血管疾病、艾滋病等）具有特殊的疗效，是重要的药物资源；有些还可直接或经加工后用于化工、食品工业和饲料工业等。因此，海洋微藻是一个巨大的生物资源，微藻的培养就成为各方面探索的基础。摸索出微藻生长的最适条件就可以大量的培养以满足日益增长的研究需要。

六、实验条件

（一）仪器

1三角瓶（100ml ～ 1000ml的规格不等） 2烧杯 3分析天平 4加热器 5蒸汽灭菌锅 6净化超净台

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7移液枪（1000ul） 8酒精灯 9离心机等 （二）材料 实验室现有藻种 （三）试剂 已配好的f/2培养基

七、实验步骤

1仪器灭菌：将微藻培养用的三角瓶以封膜封口，121℃湿热灭菌20分钟，冷却备用。 配制人工海水：按照海水配方（配方见附录）配制人工海水，装入三角瓶（每瓶1000ml），加热灭菌后，冷却备用。

2配制f/2培养基：以人工海水为基础，加入f/2培养基营养盐，制备培养基。

海洋微藻接种：在250 ml的三角瓶中，加入100 ml f/2培养基，按照10%的接种量接种藻液。 3微藻的培养：接种后的藻液瓶置于装有日光灯的架台上，培养温度25～30℃，光照周期12：12，每日摇瓶2～3次，同时观察藻种的生长情况，随时进行适当的调整。

4藻体细胞的收集：微藻培养7～10天就进入对数生长期，可以回收藻体细胞，将藻液以4500 r/min的速度离心15分钟收集藻体，冻存藻泥或真空冻干成藻粉保存已备后续分离活性物质实验。

八、思考题

1影响微藻生长的因素有哪些？ 2微藻的实际应用有那些？

九、实验报告

要求学生在实验之前认真阅读实验指导及相关资料，进行归纳总结，完成实验预习报告。实验过程中，认真记录实验步骤，观察实验现象，记录实验结果。实验报告的内容包括：（1）实验目的；（2）实验原理；（3）生物材料、试剂、实验仪器；（4）实验步骤；（5）实验结果和分析；（6）思考题。要求学生在实验指导及实验操作的基础上，独立进行归纳总结，完成一份内容完整、条理清晰、重点突出的实验报告。

十、注意事项及其它说明

规范使用实验仪器，并注意电源安全。

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