生物技术专业大实验实验指导 (6)

3．比较蛋白质检测方法中染色法与印迹法的异同 4．比较ELISA和western blotting的异同

5．Western blotting中如何减少非特异性条带的出现？

九、实验报告

要求学生在实验之前认真阅读实验指导及相关资料，进行归纳总结，完成实验预习报告。实验过程中，认真记录实验步骤，观察实验现象，记录实验结果。实验报告的内容包括：（1）实验目的；（2）实验原理；（3）生物材料、试剂、实验仪器；（4）实验步骤；（5）实验结果和分析；（6）思考题。要求学生在实验指导及实验操作的基础上，独立进行归纳总结，完成一份内容完整、条理清晰、重点突出的实验报告。

十、注意事项及其它说明

规范使用实验仪器，并注意电源安全。

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实验九 细胞凝集反应

一、实验目的

观察细胞凝集现象并了解其原理。 二、实验内容

用土豆凝集素对鸡血细胞进行凝集反应。

三、实验要求

集中授课

四、实验准备

在进行实验之前，要求学生在对课堂相关知识点理解和掌握的基础上，认真阅读本实验指导，并进行归纳总结，完成预习报告。

五、实验原理、方法和手段

细胞膜是双层脂镶嵌蛋白质结构，脂和蛋白质又能与糖分子结合为细胞表面的分枝状糖外被。目前认为：细胞间的联系，细胞的生长和分化，免疫反应和肿瘤发生都和细胞表面的分支状糖分子有关。

凝集素（lectin）是一类含糖的（少数例外）并能与糖专一结合或的蛋白质，它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。凝集素使细胞凝集是由于它与细胞表面的糖分子廉洁，在细胞间形成“桥”的结果，加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集。

六、实验条件

1． 土豆块茎

2． 显微镜，粗天平，载玻片，滴管2支，离心管2支 3． PBS缓冲液 4． 2%红细胞液

七、实验步骤

1．称取土豆去皮块茎2g，加10mL PBS缓冲液，浸泡2h，浸出的粗提液中含有可溶性土豆凝集素。

2．用滴管吸取土豆凝集素和2%红细胞各一滴，置载玻片上充分混匀。静置20min后于低倍显微镜下观察血球凝集现象。

3．以PBS液代替土豆凝集素与2%红细胞做对照实验。

八、思考题

1．如何检测红细胞表面哪些成分与土豆凝集素发生反应？

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2. 试举出其他凝集素引起细胞凝集反应的例子

九、实验报告

要求学生在实验之前认真阅读实验指导及相关资料，进行归纳总结，完成实验预习报告。实验过程中，认真记录实验步骤，观察实验现象，记录实验结果。实验报告的内容包括：（1）实验目的；（2）实验原理；（3）生物材料、试剂、实验仪器；（4）实验步骤；（5）实验结果和分析；（6）思考题。要求学生在实验指导及实验操作的基础上，独立进行归纳总结，完成一份内容完整、条理清晰、重点突出的实验报告。十、注意事项及其它说明

规范使用实验仪器，并注意电源安全。

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实验十 细胞膜的渗透性

一、实验目的

了解细胞膜的渗透性及各类物质进入细胞的速度。 二、实验内容

将红细胞置于不同的等渗溶液中，观察溶质能否进入细胞以及进入细胞的速度。

三、实验要求

集中授课

四、实验准备

在进行实验之前，要求学生在对课堂相关知识点理解和掌握的基础上，认真阅读本实验指导，并进行归纳总结，完成预习报告。

五、实验原理、方法和手段

将红细胞放入各种等渗溶液中，由于红细胞对各种溶质的透性不同，有的溶质可以渗入，有的溶质不能渗入，渗入的溶质能提高红细胞的渗透压，所以促使水分进入细胞，引起溶血。由于溶质透入速度互不相同，因此溶血时间也不相同。

六、实验条件

1． 器材：50mL小烧杯，10mL移液管，试管，试管架，显微镜

2． 试剂：0.17mol/L NaCl，0.17mol/L NH4Cl，0.17mol/L NH4Ac，0.17mol/L NaNO3，0.12mol/L

草酸胺，0.12mol/L Na2SO4，0.32mol/L葡萄糖，0.32mol/L甘油，0.32mol/L乙醇，0.32mol/L丙酮。 3． 材料：鸡血

七、实验步骤

4． 鸡血细胞悬液

取50mL小烧杯一只，加1份羊血和10份0.17mol/L NaCl，混匀成不透明红色液体。此即为稀释鸡血。

5． 低渗溶液

取试管一支，加入蒸馏水10mL和稀释鸡血1mL，注意观察溶液颜色的变化，由不透明的红色逐渐澄清，说明红细胞发生破裂造成100%红细胞溶血，使光线比较容易透过溶液。

6． 鸡红细胞的渗透性

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（1）取试管一支，加入0.17mol/L NaCl 10mL和稀释鸡血1mL，轻轻摇动，注意观察颜色有无变化？有无溶血现象？为什么？

（2）取试管一支，加入0.17mol/L NH4Cl 10mL和稀释鸡血1mL，轻轻摇动，注意观察颜色有无变化？有无溶血现象？若发生溶血，记下时间（自加入稀释羊血到溶液变成红色透明澄清所用时间）。

（3）分别在另外8种等渗溶液中进行同样的誓言。步骤同2。 （4）平行取样品于显微镜下观察细胞形状变化

八、思考题

除了用溶血时间标志各种低渗溶液的溶血作用，还有哪些方法可以采用？能否定量表示？

九、实验报告

将观察到的现象记入下表，对实验结果进行比较和分析。

表1 不同低渗溶液下的溶血现象

编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 试验溶液 蒸馏水 NaCl NH4Cl NH4Ac NaNO3 草酸胺 Na2SO4 葡萄糖 甘油 乙醇 丙酮 是否溶血 时间 结果分析 要求学生在实验之前认真阅读实验指导及相关资料，进行归纳总结，完成实验预习报告。实验过程中，认真记录实验步骤，观察实验现象，记录实验结果。实验报告的内容包括：（1）实验目的；（2）实验原理；（3）生物材料、试剂、实验仪器；（4）实验步骤；（5）实验结果和分析；（6）思考题。要求学生在实验指导及实验操作的基础上，独立进行归纳总结，完成一份内容完整、条理清晰、重点突出的实验报告。

十、注意事项及其它说明

进入实验室，必须穿实验服。保持实验台的整洁，自己的物品需放置在指定位置，贵重物品随身携带。规范使用实验仪器，并注意电源安全。

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