百合的组织培养技术综述(4)

组培经典3

80湖北农业科学　HUBEI　AGRICULTURAL　SCIENCES　No11,2004

果最佳。叶基部易分化成苗,结鳞茎率较高,鳞茎

直径较大;叶片中部较难成苗,结鳞茎率低,鳞茎直径较小;而叶尖则不分化结鳞茎[20]。GA3为210mg L-1时对龙牙(万载)百合的诱导率和分化鳞叶

1,2,3-噻二唑-5-脲)为2μg L-1时,即可诱导

渥丹愈伤组织完成器官发生(频率达4716%),这表

明TDZ等也可在单子叶植物中表现出很高的细胞分裂素活性[31]。

IAA对诱导鳞片形成愈伤组织有促进作用,而它对不定芽分化有强烈的抑制作用[16]。

因此,对于不同基因型的百合,激素的浓度和搭配比例与芽的诱导和增殖有密切关系,所以,在选择出最佳的外植体后,激素的浓度和配比是百合组织培养中的关键因素。214　培养基类型对百合组织培养的影响

一般用于百合组织培养的培养基类型为MS培养基。其利于山丹形成愈伤组织并形成再生鳞茎和成根;而LS培养基则只有少量水浸状愈伤组织形成,且质地松、生长慢[32]。罗凤霞等[6]认为,MS培养基优于SH培养基。杨柏云等[44]用3种培养基,即MS、改良MS(将MS中的NH4NO3去掉,KNO3加倍)、B5,以鳞片研究切花百合(L.browniiviridulum)的液体振荡增殖培养,上的平均小鳞茎数有促进作用[7]。罗丽萍等[7]认

为,液体振荡培养对次级小鳞茎的增殖效果明显优于固体培养。是否低温处理对鳞片分化小鳞茎也有影响,王家福等[45]将百合鳞片接种后,先经过低温

),再在(25±处理2周(温度为4℃1)℃常温条件下

培养,结果发现经低温处理的百合鳞片分化率提高5010%。216　继代次数对分化能力的影响

在龙牙百合再生获得的小鳞茎上切取小鳞片转到MS+011mg L-1KT+0115mg L-1NAA的继代培养基上进行继代培养,d转移1次,每次2～3次时,,,代到第6次时,分化率为]杜捷等也发现兰州百合愈伤组织在继代5次后无分化能力[17]。217　再生植株的染色体数量变异百合属植物离体条件下会发生体细胞变异。周朝鸿等[46]利用硫花百合、通江百合、百合等的植株上部叶腋间的珠芽为外植体,经愈伤组织形成再生植株,通过观察再生植株体细胞发现均不同程度地出现了染色体数量的变异。它们正常体细胞染色体数均为2n=2x=24。变异包括倍性变异和非倍性变异。倍性变异发现于硫花百合和百合细胞中,前者的变异类型为3倍体和4倍体,后者的变异类型为3倍体。非倍性变异在3个种中都出现,且变异范围一致,即2n=22(2x-2)、23(2x-1)、25(2x+1)、26(2x+2)。杜捷等[17]也对兰州百合组培过程中的染色体行为进行了研究,发现随着其继代次数的增加,愈伤组织细胞染色体数目变异随之增加。产生变异的原因是组培中物理和化学(激素、培养基成分)因素影响调控细胞分裂的基因表达的结果[17,46]。虽然这种变异是组培中出现的正常现象,但将导致百合新基因型的植株出现,给百合属植物的进化和细胞育种带来较大影响。218　组织培养苗的生根和移栽

一般的生根培养堪用1/2MS培养基,并附加015～110mg L-1的NAA,或附加0125mg L-1的IBA[12],或附加110mg L-1的IAA[16]。据袁芳

MS,NH4+态氮改变为NO3响不大。卢其能等[11]以龙牙百合的鳞片切块,通过

比较MS、B5、White3种培养基分化出小鳞茎或芽的效果发现,分化最好的是MS培养基,其次是B5,最差的为White。Arzate等[9]用MS、N6、B5、1/4MS、White、White+鳞茎提取液共6种培养基研

究麝香百合带花药的花丝外植体的诱导和再生,发现N6培养基结合光培养或暗培养和B5培养基结合暗培养的效果很好。215　影响鳞茎诱导的因素在百合组织培养中,通过诱导小鳞茎的形成是实现再生和快繁的重要途径。不同部位的百合鳞片分化小鳞茎的能力不一,一般认为其分化能力大小依次为下部>中部>上部[2,4,7,27,40,45]。金英善等[42]认为,卡萨布蓝加百合外部鳞片很少形成小鳞茎,内部鳞片上形成小鳞茎较多;外部鳞片的顶部和中部不产生小鳞茎,基部可以产生一些小鳞茎;内部鳞片的中部和基部可形成50%以上的小鳞茎。不同季节鳞片与百合小鳞茎的形成有关,王家福等[45]认为,各季节分化能力高低的顺序为:春季>秋季>夏季>冬季。蔗糖浓度对百合鳞茎形成影响明显,蔗糖浓度为3%时,没有小鳞茎形成,蔗糖浓度为10%时,结鳞茎率最高[45];多效唑对百合根、叶生长有抑制作用,浓度越高抑制越明显,浓度为10mg L-1对鳞茎的形成起促进作用,其结鳞茎率最高,效

亭[38]研究麝香百合时发现,在生根培养基中再添加1010mg L-1的多效唑有促进生根和壮苗的作用;同时他们认为当试管苗根长1cm时移栽至珍珠岩

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