表观遗传学药物影响乳腺癌细胞系抑癌基因BRCA1及CHD5表达的研究(5)

［19］

3讨论

。TSA单

［20］

Xiong独应用即可重建甲基化沉默的基因表达，酰化介导组蛋白甲基化的逆调控机制等

［21］

表观遗传学调控导致的抑癌基因沉默或低表达

［11］

基已被证实是肿瘤病因学上的关键进程。其中，因启动子甲基化和组蛋白乙酰化是调节染色体结构

进而控制基因表达的两个主要机制。表观调控由于不涉及DNA序列改变而具有可逆性，这使其成为

DNMT和肿瘤临床治疗的新靶标。研究表明，

HDAC抑制剂可重建或增强肿瘤中抑癌基因的表

［12-15］

，达并抑制肿瘤细胞增殖因此，这两类制剂已成为治疗多种肿瘤的候选药物。

AZA和TSA对乳腺癌细胞系本研究应用5-T47D及MCF-7进行处理，并以永生化的乳腺正常100为对照，上皮细胞系HBL-观察表观遗传学调控

对抑癌基因BRCA1及CHD5表达的影响。定量RT-PCR结果提示，不同浓度AZA作用均可提高T47D及MCF-7细胞两抑癌基因的表达。TSA各7细胞两基因的表达，浓度可增强MCF-低浓度TSA

作用短时间亦可使T47D细胞抑癌基因表达升高，而高浓度长时间作用则可使抑癌基因表达低于空白

甚至完全关闭其表达。此时管家基因表达亦对照，

降低，至正常值的1/4～1/8（数据未显示），推测过乙酰化可破坏染色体正常构象，降低全基因组表达水平

［16］

发现TSA可通过调节DNMT3B的活性影响

基因的甲基化状态，证实TSA可介导由多条途径调控癌细胞抑癌基因的表达。

目前虽已有表观遗传学药物应用于肿瘤的临床治疗，但为降低毒性，取得最佳疗效，其给药剂量及一定剂量给药时间仍须探讨。本研究结果显示，

AZA和TSA作用可提高乳腺癌细胞系BRCA1及CHD5的表达，且药物对不同细胞系不同基因表达的作用不一致；而过高剂量药物作用反致表达降低，且对乳腺正常上皮细胞呈毒性作用，进一步证实了个体化用药及制定最佳用药方案的重要性。为表观遗传学药物在乳腺癌临床治疗中的科学应用提供实验依据。

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［2］

。

低浓度AZA和TSA作用较短时间时对乳腺正

100抑癌基因表达无影响，而高浓常上皮细胞HBL-1μmol/L和度长时间作用可使抑癌基因表达降低，

1．5μmol/LTSA作用48h细胞完全脱落，提示维持甲基化/去甲基化和乙酰化/去乙酰化的平衡状态对维持正常基因表达和细胞正常功能非常必［17-18］

。要

尽管AZA作用可提高乳腺癌细胞两抑癌基因

7细胞但MSP未能显示AZA对MCF-的表达，

BRCA1和CHD5及T47D细胞BRCA1甲基化状态

的影响，提示可能有本研究所用甲基化特异引物扩增区域以外的CpG岛参与基因表达的甲基化调控。AZA作用可逆转T47D细胞中CHD5的不完全甲这与AZA可共价结合基化状态并使其表达升高，

DNMT1，降低酶活性而实现去甲基化的功能相符。TSA作用亦可逆转T47D细胞中本研究同时发现，

CHD5的不完全甲基化状态。有别于普遍认可的CpG甲基化后，通过甲基化DNA结合蛋白募集组蛋白去乙酰化酶及其他转录相关因子，进而调控基因表达的传统理论，近来研究揭示了一条DNA乙

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